液相色谱仪(HPLC)检测饲料中L-肉碱方案

旋肉碱（L-肉碱）又称肉毒碱，是一种水溶性氨基酸，由赖氨酸衍生而来。分子结构为L-γ-*胺β-羟丁酸，分子式为C7H16NO3，分子量为161.2。它是B族维生素类似物，曾被称为维生素BT。其分子结构中含有一个可供脂肪酸脂化的羟基，其饱和键和极性官能团有良好的水溶性和吸湿性，200℃以上它仍稳定存在，可在PH3~6的溶液中放置一年以上而不变坏。1998年我国卫生部将L-肉碱批准为食品添加剂，列入营养强化剂类。

　　莱顿公司推荐液相色谱仪-检测饲料中L-肉碱的含量，得出的结果准确可靠，供广大用户参考。

　　以下是饲料中L-肉碱的详细检测方法。

1　 仪器与试剂

1.1 仪器
　　液相色谱仪
　　液相色谱柱　C18  250mm×4.6mm×5μm
　　实验室常用仪器设备
　　超声波水浴
　　分析天平（感量0.001g）
　　0.45μm水性滤膜

1.2 试剂  
　　异丙醇，色谱纯。
　　甲醇，色谱纯。
　　乙腈，色谱纯。
　　磷酸氢二钠。
　　磷酸二氢钾。
　　三乙醇胺。
　　柠檬酸。
　　氧化银。
　　肉碱衍生剂。

2 　测定原理
　　样品经加乙醇超声提取后，然后加入肉碱衍生剂，将衍生物注入液相色谱反相柱上进行分离，用紫外检测器在210nm波长处定量测定。

3 　试样溶液的制备
　　称取5g试样于100ml烧杯中，加入30ml无水乙醇，溶解并转移至100ml容量瓶中，先后用10ml无水乙醇分3次洗涤烧杯，样液转移至100ml容量瓶中，超声提取10min后用无水乙醇定容至刻度，混匀后于4000r/min离心5min。取上清液2ml，加入肉碱衍生剂0.25ml（衍生剂配制方法：40 mg P-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈，加入40% 氢氧化四丁基铵50 µl），混合后置于60℃恒温水温箱120 min，吸取20 µl进样分析。

4　 色谱条件
　　色谱柱：C18柱　250mm×4.6mm×5μm；
　　流动相：甲醇：磷酸盐=5:95
　　流速：1.0mL/min；
　　温度：室温；
　　进样量：20μL；
　　检测波长：210nm。

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