液相色谱作为一个既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离的仪器，具有灵活多样的特点，其应用范围已超过其他各种分离方法，尤其在中药样品的分析分离方面更为突出。而液相色谱在使用过程中容易出现一些问题，如果不对这些问题进行解决，就可能会影响分析结果，从而影响整个实验。因此，今天我们就来讨论一下液相色谱使用过程中可能会出现的问题。
 

　　在液相色谱使用过程中，比较常见的主要有柱压异常(包括过高或者过低)、峰形异常、基线漂移等。下面我们就来讨论一下这几个问题的原因和解决方法。
 

　　1、柱压异常
 

　　柱压异常包括过高与过低。柱压过高是常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。
 

　　2、峰形异常
 

　　1)所有峰均为负峰。解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。

　　2)所有峰均为宽峰。解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。

　　3)色谱图中未出峰。解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。

　　4)一个峰或几个峰是负峰。解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。

　　5)所出峰比预想的小。解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确；定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。

　　6)出现双峰或肩峰。解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

　　7)前伸峰。解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。

　　8)拖尾峰。解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。

　　9)出现鬼峰。解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。

　　10)出现平头峰。解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
 

　　3、基线漂移
 

　　一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：

　　1)流通池被污染或有气体。解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(断开柱子更好)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)；

　　2)柱温波动。解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱；

　　3)紫外灯能量不足。解决方法：更换新的紫外灯；

　　4)检测器没有设定在大吸收波长处。解决方法：将波长调整至大吸收波长处；

　　5)流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂；

　　6)样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子；

　　7)流动相的PH值没有调节好。解决方法：加适量的酸或碱调至合适PH值。
 

　　总的来说，在遇到问题时，需要按照排除法依次确定导致问题的原因，之后要做的就是修正和调整并且记录问题，只要做好这样的工作就不怕以后会出现问题。