氨基酸分析仪检测透明胶质类中的游离氨基酸
时间：2023-09-27 阅读：1050
摘要
本品为Tau、Glu、Gly、Val、Cysteine等5种氨基酸配制而成的透明胶质类物质，使用Biochrom30+全自动氨基酸分析仪，对其所含的游离氨基酸组分及含量进行分析，并了解对该样品高温灭菌前后，所含氨基酸的具体影响。结果表明该未知样中氨基酸各单个氨基酸含量的浓度，及高温灭菌前后的分别见附页结果表。
大昌华嘉是一家专注于亚洲地区，在市场拓展服务领域处于领先地位的集团。大昌华嘉致力于帮助其他公司和品牌拓展在消费品、医药保健、特色原料、科技事业领域的业务。大昌华嘉的服务范围包括采购、市场研究与分析、市场营销与销售、配送与物流以及售后服务。公司在瑞士证券交易所上市，在全球35个市场营运，拥有33,000名专业员工， 2018年销售净额为113亿瑞士法郎。大昌华嘉于1865年成立，凭借深厚的瑞士传统背景，公司在亚洲开展业务历史悠久， 深深植根于亚太地区的社会和企业界。大昌华嘉科技事业部专注于为特定的行业应用领域提供全面的解决方案。2018年该业务单元拥有1,220名员工，净销售额为4.121亿瑞士法郎。
大昌华嘉(大昌洋行（上海）有限公司)是一家专注于亚洲地区，在市场拓展服务领域处于领先地位的集团。大昌华嘉致力于帮助其他公司和品牌拓展在消费品、医药保健、特色原料、科技事业领域的业务。大昌华嘉于1865年成立，凭借深厚的瑞士传统背景，公司在亚洲开展业务历史悠久，深深植根于亚太地区的社会和企业界。
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一、样品前处理
1、所用试剂
1.1 Loading Buffer：锂盐系统，pH 2.2
1.2 磺基水杨酸溶液：取50g磺基水杨酸溶于1L纯水中
1.3 乙二胺四乙酸二钠溶液：取10g EDTA-Na溶于1L纯水中
1.4 0.06mol/L 盐酸：取50mL 盐酸加水稀释至10mL,混匀
1.5 5种氨基酸标准品、Cystine单标
2、前处理设备
1) 分析天平:精度为 0.0001g
2) 移液枪及枪头
3) 0.22um滤膜
4) 一次性注射器
5) 低范围pH试纸
3、样品制备（参考NY/T 1975-2010）
因样品为透明胶质类物质，且可能含有未知大分子等杂质，故需(参考NY/T 1975)进行除蛋白前处理：
吸取2 mL样品于10 mL离心管或试管中,准确加人2 mL磺基水杨酸溶液(1.2)，混匀,放置1h。准确加入1 mL EDTA-Na溶液(1.3)和1 mL盐酸溶液(1.4),混匀,离心15 min(或用0.45um的微孔滤膜过滤)。吸取上清液(或滤液)1 mL(测定当前pH，若有需要则可加少许的Loading Buffer (1.1),使氨基酸浓度处于仪器检测范围内)，移液枪取上述溶液1mL至一次性注射剂，过滤膜，上机待测。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析仪分析方法参数：
1) 色谱柱：Biochrom Li型阳离子交换树脂柱，4.6*20cm
2) 分离程序：
3) 运行时间：经分析时间+再生时间 168.15min
4) 反应单元温度：135°C。
5) 检测波长：570nm、440nm同时检测。
三、样品中氨基酸含量的计算
样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算:
Ci = Cs/As × Ai× F ················· (1)式中:
Ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
F ———样品稀释倍数。
附：透明胶质类物质中，高温灭菌前后比较的游离氨基酸，分析图谱及做样结果：
由结果可知：高温灭菌之后的游离氨基酸含量，相较于灭菌前会有少许提升。这是由于灭菌前的样品中可能含有的少许干扰物质或杂菌，存在经过高温灭菌等的处理会被破坏，释放少许的氨基酸的可能，属合理正常现象。
图1. 样品A--灭菌前—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine
图2. 样品B--灭菌后—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine
