EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氢大麻酚代谢物并以GC-MS定量
时间：2022-07-11 阅读：2083
在(-)-11-nor-9-羧基-△9-四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)的气相色谱-质谱分析中，评估了EmporeTM固相萃取柱（4215SD-C18）的样品制备。固相萃取柱性能由测定的回收率决定。回收率范围在78.7-110.1%。标准曲线线性范围在0.15μg/mL~3.0μg/mL时，相关系数R2=0.9998。
关键词：
四氢大麻酚，THCCOOH，外标法，GC-MS
前言：
美国CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技术，以其有机溶剂消耗少、结果重现性高、样品制备的通量高、提取物更清洁，可减少 GC 系统的污染以及自动化提取等优势[1]，广泛应用于药物检测领域[2,3]。本实验使用美国CDS公司膜式固相萃取柱（EmporeTM，4215SD-C18）提取尿液中△9-四氢大麻酚（THC，大麻）代谢物（-）11-nor-9-羧基-△9-四氢大麻酚 (THCCOOH)，并以GC-MS分析定量。
1， 实验过程
1.1 仪器与试剂
所有试剂均为分析纯或更高。
THCCOOH（100.0±0.6 μg/mL）和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化试剂，均购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司；
人工尿液（PH：5.7-500mL），购自福州飞净生物科技有限公司；
乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；
甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；
正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；
EmporeTM 膜式固相萃取柱：4215SD-C18，购自美国CDS公司；
气质联用仪：7890B-5977B安捷伦气质联用仪，Agilent公司。
1.2 工作液配制
THCCOOH标准使用溶液：0.1 μg/mL，溶剂体系为甲醇；
1.3 实验部分
1.3.1 样品制备
取12个15mL离心管，分别装入3mL尿液样品，再加入不同体积的THCCOOH标准使用液（加标量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng），每个标点进行平行两次制备。然后加入300μL氢氧化钾溶液（10mol/L）,在60℃水浴环境下水解15min取出后冷却至室温，再以冰醋酸调节pH值到4.0~4.5。
EmporeTM固相萃取柱（C18, 7mm/3mL）预先用150μL甲醇进行活化，之后进行上样（在重力作用下使样品自然流下），上样结束后用750μL甲醇-水溶液（50：50）淋洗萃取柱，在690mmHg真空状态下干燥5min，最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液（75：25）进行洗脱。
1.3.2 净化与浓缩
洗脱液经40℃氮吹至干，然后加入100μL衍生试剂（MSTFA+1%TMCS），在60℃水浴条件下衍生20min，转移至样品瓶待 GC-MS分析。
1.3.3 标准曲线配制
取6个20mL样品瓶，分别加入不同体积THCCOOH标准使用溶液，加入THCCOOH的质量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，参照与加标样品制备同等浓缩、衍生条件进行前处理，待GC-MS分析。
1.3.4 GC-MS分析
进样口温度：290℃；进样模式：不分流进样；流速：1.0mL/min；
柱温：100℃保持1min，然后以30℃/min的速度升至300℃，保持5min。
表1 THCCOOH定量、定性离子
| 化合物 | 定量、定性离子 | 保留时间（min） |
| THCCOOH | 371/473/488 | 12.158 |
2, 实验结果（外标法）
实验发现：标准曲线第一个点（3ng）信噪比较低，难以准确积分。标准曲线第五个点（150ng）结果明显偏低，为实验操作衍生化失误引进误差。
图1标准曲线校准点重叠色谱图
图2 标准曲线
3，结果与讨论
本次实验展示了一种使用CDS-EmporeTM 固相萃取柱（215SD-C18），对尿液中四氢大麻酚代谢物（THCCOOH）进行富集提取的简单有效方法。实验中，尿液加标样品经水解、固相萃取净化、浓缩以及衍生等前处理步骤后，经GC-MS分析得到不同浓度下四氢大麻酚代谢物（THCCOOH）的加标回收率，回收率范围在78.7-110.1%，结果较好。标准曲线浓度范围在0.15μg/mL~3.0μg/mL时，相关系数R2=0.9998，具有较好线性。实验表明，CDS-EmporeTM 固相萃取柱（215SD-C18）适用于尿液中四氢大麻酚代谢物（THCCOOH）的萃取净化。该方法具有操作简便，线性范围宽，稳定性高等优点，并在尿液量少，分析物浓度较低时显示出优异的回收率。
4，参考文献
1，Jasbir Singh and Linda Johnson，Solid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MS，Journal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997。
2，R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.
3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-△9-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)
图3 不同浓度加标样品重叠色谱图
表2 加标回收率结果
| 序号 | 加标量 | 回收率 % | 均值 % | |
| ng | 1 | 2 | ||
| 1 | 15 | 82.2 | 96.4 | 89.3 |
| 2 | 30 | 101.8 | 109.4 | 105.6 |
| 3 | 60 | 89.2 | 78.7 | 83.9 |
| 4 | 150 | 93.1 | 101.3 | 97.2 |
| 5 | 300 | 91.4 | 110.1 | 100.7 |
注：因3ng标点信噪比偏低，在此不做数据统计