血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案
时间：2024-07-24 阅读：1019
简介
本方法使用创新型分体式HMR净化管/96孔板结合96孔正压固相萃取装置一步式净化血清样品，再通过LC-MS/MS进行检测，回收率达90%左右。样品处理过程简单，结果准确。
方法优势
Ø 蛋白沉淀和磷脂去除一步完成，可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响
Ø 通过式净化，极大简化前处理步骤，约1h即可完成前处理操作
Ø 上样量仅需50μL，大大节省了宝贵的样品
Ø 试剂耗材使用量更少，更加环保节约
Ø 柱效远超直通式SPE，回收率稳定，可达90％左右
配套设备及耗材
| 序号 | 产品名称 | 产品描述 |
| 1 | 96孔正压固相萃取装置 | EZ PRE-96正压固相萃取装置 |
| 2 | 96孔氮吹仪 | EZ VAP-96氮吹仪 |
| 3 | 双位96孔氮吹仪 | EZ VAP-192双位96孔氮吹仪 |
| 4 | MixMate® 混匀小精灵 | MixMate®主机，不含样品管管架，230 V/50-60 Hz（CN） |
| 5 | 8道移液器 | 8-通道，10-100µL, 可调量程 |
| 6 | 超效分体96孔集成板HMR | HMR S-micro BIO 96 Well, 15mg, 1 mL, 1/PK |
| 7 | 超效分体96孔SPE板HMR | HMR S-micro BIO SPE, 15mg, 1 mL, 100/PK |
| 8 | 超效96孔板微径小柱适配器 | Micro columnadapter rack，SUS,1/PK |
| 9 | 20种全氟混标（包含方法中15种全氟） | PFAS Mixture with 20 analytes, 5 µg/mL in Methanol/Water，1mL |
| 10 | 11-氯-3-氧杂全氟十一烷磺酸钾 | 50 µg/mL，1mL，甲醇/水，CAS：83329-89-9 |
| 11 | 13种全氟内标 | Mass-Labelled PFC Extraction Standards Solution 2.0μg/mL 1.2mL |
| 12 | 血清中全氟质控品Y2403 | INSPQ PFC Reference Material Y2403，1/kit |
| 13 | 血清中全氟质控品Y2301 | INSPQ PFC Reference Material Y2301，1/kit |
| 14 | 血清中全氟质控品Y2304 | INSPQ PFC Reference Material Y2304，1/kit |
| 15 | Leosil C18/PFP核壳柱（GB23200.121方法专用） | Leosil Shell C18/PFP, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/PK |
| 16 | 96孔收集板 | Collection Plate, 1 mL/Round/U-Shaped, 96 Well, 10/PK |
| 17 | 封板膜 | 660 Tape Sealing Pad for 96 Well Plate，25 Sheets/Pad，10Pad/pk |
样品前处理
仪器条件
1）色谱条件
色谱柱：Leosil C18/PFP核壳柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）
流动相：5mmol/L乙酸铵甲醇（A），5mmol/L乙酸铵水溶液（B）
流速：0.4mL/min
柱温：50℃
进样量：2μL
流动相梯度表
2）质谱条件
AB 6500+质谱检测器采用多反应检测模式（Multiple
Reaction Monitoring，MRM），ESI负离子模式。
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：负离子扫描；
检测方式：多反应离子监测（MRM）；
电喷雾电压：-4500V；
离子源温度：400℃；
辅助气1：60psi；
辅助气2：60psi；
气帘气：30psi；
碰撞气体：Medium
目标PFASs的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表
方法定量限
在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限（Limit of quantification，LOQ）：（1）在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度，信噪比采用RMS（Root Mean Square，RMS）方法；（2）标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20％之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释，无稀释倍数，因此方法定量限即为LOQ，如下表。
16种PFASs的定量限
回收率和精密度
血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度（n=6）
实验注意事项
1、内标体积太小（50、20微升），稍微有损失，就会影响定量，所以建议先加样品、再加内标，最后加乙腈；
2、加液体过程中，一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪，特别是小体积加样时；
3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈，可能洗脱不完全，净化管里有残留。压完一次，加入乙腈，再正压；
4、乙腈：血清的比例从3：1开始优化；
5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。