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马脏器组织白细胞分离液说明书

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2016/8/19 11:21:22

马脏器组织白细胞分离液说明书

 

(细胞培养及分子生物学)

 

【产品规格】

 

200ml/Kit

 

货号:WBC1094P

 

【产品组成】

 

为方便广大用户使用,试剂内容如下:

 

 

 

 

名称

产品编号

 

规格

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

A

马脏器组织白细胞分离液

 

 

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

B

样本稀释液(赠品)

2010C1119

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

C

清洗液(赠品)

 

 

2010X1118

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

D

F 液(赠品)

 

 

F2013TBD

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

E

红细胞裂解液(赠品)

NH4CL2009

 

100ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

F

说明书

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【实验前准备】

 

 

 

 

 

 

 

A 适用仪器

 

 

 

 

 

 

 

 

zui大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

 

 

 

 

 

B 耗材

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

产品名称

 

产品货号

 

产地

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 离心管散装

 

339650

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 离心管架装

 

339651

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 离心管散装

 

339652

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 离心管架装

 

339653

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

无菌胶头滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【检验方法】

 

 

 

 

 

 

 

 

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

 

  1. 首先制备组织单细胞悬液,制备方法详见组织单细胞悬液制备技术

 

  1. 取一支 15ml 离心管,加入与制备的组织单细胞悬液等量的分离液(注:分离液zui少不得少于 5ml)。

 

 

  1. 用吸管小心吸取制备的组织单细胞悬液加于分离液液面上,400-500g,离心 20-30min。(注:根据组织单细胞悬液样本量确定离心条件,组织单细胞悬液量越大,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到*分离效果)。

 

  1. 离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层(一层或两层),加入 10 ml 清洗液(产品编号:2010X1118),混匀细胞。250g,离心 10min。重复洗涤 2-3 次,即得所需白细胞。

 

  1. 如有红细胞残留请使用红细胞裂解液(产品编号:NH4CL2009)裂解红细胞,具体操作方法详见红细胞裂解液使用说明

 

【注意事项】

 

  1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得*的实验结果,在取样 2h 内进行实验,样品存放时间越长,细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

 

  1. 本实验不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。

 

  1. 分离液用量大于制备的组织单细胞悬液样本时,分离效果更佳。

 

  1. 如实验后细胞得率或活性过低,请上海研谨技术以寻求帮助

 

【储存条件及有效期】

 

18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启

 

封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

 

【参考值(参考范围)】

 

本实验白细胞提取率及纯度大于 80%

 

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。

 

 

红细胞

 

白细胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0×109

 

含量(个/L

4.0-5.5×1012

中性粒细胞

淋巴细胞

单核细胞

1.0-3.0×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

 

【相关实验技术方案】

 

1. 组织单细胞悬液制备技术

 

 

  1. 所获得白细胞的培养技术。

 

  1. 所获得白细胞的核酸提取技术。

 

  1. 所获得白细胞的鉴定方法A.流式细胞技术
  2. B.免疫组化技术
  3. C.原位杂交技术

 

D.PCR 技术

 

注:上述技术方案详情请登陆本公司搜索细胞分离、

 

纯化、扩增、鉴定及生物治疗技术手册,并在说明书项目栏下下载使用。

 

【可能存在的问题及解决方法】

 

1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示:

 

出现情况

出现原因

建议解决方案

 

 

 

离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层

转速过小或离心时间过短

适当增减转速

 

 

离心后目的细胞存在于分离液中

转速过大或离心时间过长

 

 

 

 

离心后白环层弥散

细胞密度过大

调整细胞密度

 

 

离心后白环层太浅或看不见

细胞密度过小

 

 

 

 

 

  1. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离心时间,对离心转速进行调整。

 

  1. 本分离液依照标准,全部使用药用级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可

 

能出现红细胞沉降不*的情况,可以适当加大离心转速。

 

注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以 50-100g 为基数,直至达到*分离效果,

 

离心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。

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