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分析现象:Elisa试剂定量检测中无CT值出现

上海恒远生化试剂网

2016/8/30 10:47:38

    ELSIA操作步骤复杂,影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽,曲线zui高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,*较呈直线的部分是的检测区域。今天恒远为您分析试剂检测中无CT值(信号)出现现象。
    无CT值(信号)出现导致原因:
1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45cycles),但高于45个循环会增加过多的背景信号。
2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。
4.引物或探针的设计,如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
5.模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的zui高浓度做起。
6.模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
    上海恒远所售出产品均提供售后服务,保证产品质量。凡够买我公司ELISA检测试剂盒可免费提供代测服务。

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