DH5α感受态细胞操作方法及特点

DH5α感受态细胞

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2. 向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。
3. 将离心管置于 42℃水浴中热击60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。
4. 向离心管中加入 900μl 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 180 rpm 振荡培养 30分钟到1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5. 取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16小时或隔夜培养。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取200μl 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA 总量较少，可4℃，2500g离心5min后，弃去上清约700μl，用剩余约200-300μl 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。

DH5α感受态细胞特 点:  一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 β 互补，可用于蓝白斑筛选。

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