上海远慕生物科技有限公司
2016/11/18 11:42:54流式检测—抗体的选择
1.流式抗体的选择
流式实验一般选择直接标记,如没有带荧光标记的一抗,则需要一抗+荧光二抗搭配
常用荧光素:FITC,PE,PE-Cy5为目前流式细胞仪的常用荧光染料
荧光素的搭配主要由3个因素决定
1)流式细胞仪能检测多少个通道:
标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光,能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色;
而选配的Calibur配有488nm和635nm两根激光,可以检测FL1-FL4四个通道。
2)需要同时检测多少个指标:
一般3个或4个,常用的搭配是FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4)
3)厂家的抗体有多少种荧光标记
2.同型对照的选择
一般选择与一抗的成分*相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体,如抗人的CD56APC标记的抗体,MouseIgG,k;则同型对照是APC标记的MouseIgG,k。
如果是纯化的抗体+荧光标记二抗,那么应该选择一抗的同型对照。
3.目标客户群
流式检测平台、细胞实验室
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