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大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)酶联免疫分析

上海岚兴生物科技有限公司

2016/11/23 10:07:13

大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)酶联免疫分析

 

  本篇文章由专业生化试剂供应商上海岚兴生物为您提供。

 

本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中软骨寡聚基质蛋白(COMP)的含量。

实验原理

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平。用纯化的大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入软骨寡聚基质蛋白(COMP),再与HRP标记的COMP抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的软骨寡聚基质蛋白(COMP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)浓度。

 

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:9μg/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

 

样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步骤:

 

注意事项:

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

 

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      

倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

倍数,即为样品的实际浓度。                  

                                

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批见应分别小于9%和15%

 

检测范围:                                              

0.2μg/L -8μg/L                                         

 保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:;2-8

2.有效期:6个月

 

FOR RESEARCH USE ONLY

Rat cartilage oligomeric matrix protein

 

Drug Names

Generic NameRat cartilage oligomeric matrix protein (COMPELISA Kit.

Purpose

This kit allows for the determination of COMP concentrations in Rat serum, plasma, and other biological fluids.

Principle of the assay

The kit assay Rat COMP level in the sampleuse Purified Rat COMP to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add COMP to wells, Combined COMP which With HRP labeled , become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Compley, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of COMP in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.

 

Materials provided with the kit

Materials provided with the kit

48determinations

96 determinations

Storage

User manual

1

1

 

Closure plate membrane

2

2

 

Sealed bags

1

1

 

Microelisa stripplate

1

1

2-8℃

Standard9μg/L

0.5ml×1 bottle

0.5ml×1 bottle

2-8℃

Standard diluent

1.5ml×1 bottle

1.5ml×1 bottle

2-8℃

HRP-Conjugate reagent

3ml×1 bottle

6ml×1 bottle

2-8℃

Sample diluent

3ml×1 bottle

6ml×1 bottle

2-8℃

Chromogen Solution A

3ml×1 bottle

6ml×1 bottle

2-8℃

Chromogen Solution B

3ml×1 bottle

6ml×1 bottle

2-8℃

Stop Solution

3ml×1 bottle

6ml×1 bottle

2-8℃

wash  solution

(20ml×20 fold

×1bottle

(20ml×30 fold

×1bottle

2-8℃

Specimen requirements

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 6μg/L,4μg/L ,2μg/L,1μg/L, 0. 5μg/L )

2.add sampleSet blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washingUncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzymeAdd HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubateOperation with 3.

8.washingOperation with 5.

9.color:Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37

10.Stop the reaction:Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

Important notes

Calculate 

Assay range

0.2μg/L -8μg/L

Storage and validity

1.Storage:  2-8.

2.validity: six months.

 

 

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