一、 序言
1.1己烯雌酚是一种人工合成雌激素，主要用于提高奶牛产奶量。近年来，一些商家为促进奶牛生长发育和产奶量而过度使用该激素，导致乳制品中雌激素的残留量日益严重，而这中激素极有可能增加人类患乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌及前列腺癌等的风险。牛奶制品是人类摄入己烯雌酚的主要途径，因此，为保障饮用牛奶的健康安全，对其进行相应检测*。
1.2己烯雌酚（Diethylstilbestrol） CAS:50-23-7
二、应用范围
牛奶、奶粉中己烯雌酚的检测。
三、实验条件：
仪器设备：
液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，涡旋振荡仪，氮气吹干仪，真空泵，离心机。
试剂耗材：
浓缩牛奶，己烯雌酚标品，乙腈（色谱纯），甲酸、甲醇、氨水、NaOH（均为分析纯）。
色谱柱：C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，）
SPE柱：RNSC603-MAX SPE柱（500 mg/6 mL 订货号：QCRNSC603）
四、样品制备
4.1样品提取
准确量取5 mL牛奶于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，涡旋振荡3 min， 3500 r/min离心10 min，取上清液，向残渣中再加5 mL乙腈，同前操作，合并提取液，50℃氮吹至近干，加10 mL蒸馏水，用1 mol/L NaOH调pH至11.0，9000 r/min离心5 min，上清液待净化。
4.2 SPE柱净化
（1）活化：依次用5 mL甲醇，5 mL水活化固相萃取柱。
（2）上样：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，收集流出液。
（3）淋洗：依次用1 mL氨水-水（1:19，v/v），0.5 mL甲醇以3 mL/min的流速淋洗，弃去淋洗液。
（4）洗脱：用4 mL甲酸-甲醇（1:19，v/v）以1 mL/min的流速洗脱，收集洗脱液。
（5）重新溶解：洗脱液于40℃氮吹吹干，加1 mL流动相，涡旋30 S溶解，用0.45μm滤膜过滤，供HPLC测定。
五、分析检测
液相色谱条件
色 谱 柱：C18（250 * 4.6 mm，5 μm）
检 测 器：UV2996型紫外/可见光检测器
检测波长：UV 245 nm
流 动 相：0.1%甲酸水/甲醇=30/70
流 速：1.0 mL/min
柱 温：25 ℃
进 样 量：20 μL
六、结论
上述方法进行固相萃取和液相色谱检测牛奶中的己烯雌酚，添加回收率达97.41%，表明使用RNSC603-MAX SPE固相萃取柱及C18柱，可快速可靠地检测乳制品中己烯雌酚。
