大鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒操作过程

大鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本含量。应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，通过标准曲线计算样品浓度。

工具/原料聚苯乙烯塑料板（也就是酶标板）40孔或96孔、ELISA检测仪、50μl及100μl加样器、塑料滴头、小毛巾、洗涤瓶。 2. 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。

操作过程 1 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在上海恒远生物白介素ELISA试剂盒酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

 3 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

 4 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7 温育：操作同3。洗涤：操作同5。

8 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

9 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

10 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

END 计算方法

1 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 END 注意事项试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。