一、实验材料
猪场肥猪新鲜猪粪及酿酒糟
二、主要设备及仪器
PCR扩增仪美国、高速低温离心机、浓度测定仪、超纯水系统、超净工作台；
恒温摇床、恒温振荡器、台式离心机、电热恒温水浴锅、恒温烘箱、恒温培养箱；
恒温磁力搅拌器、电子天平、计算机成像系统、医用高压灭菌锅、格兰仕微波炉；
稳压稳流电泳仪、超低温冰箱、PH计。
三、缓冲液和常用试剂的配置
1裂解液
2醋酸钾
3醋酸钠
4TE缓冲液
5TAE储备液
6琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液
7EB贮存液
四、培养基
1LB培养基:胰蛋白胨
2牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏
3马丁氏培养基：葡萄糖
4马铃薯培养基：马铃薯
5麦芽汁培养基葡萄糖
6WL营养培养基
五、酵母菌的分离与纯化
A分离：采用稀释平板分离法,称取待测样品10g左右,放入装有无菌水90ml并加入玻璃珠的离心管中,置于摇床震荡20min,使微生物细胞分散,静置。即成10-1稀释液;再用1支无菌吸管吸取10-1稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中,吹吸3次,让稀释液充分混合,即成10-2稀释液;再换1支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中,即成10-3稀释液。同理,制成10-4、10-5、10-6稀释液。取合适倍数的稀释液1ml加入到孟加拉红培养基中,静置30分钟后倒置放于28℃恒温培养箱中,培养三天。
B纯化培养:划线纯化法。灭菌PDA培养基,倒平板,挑取单菌落划线,28℃倒置培养三天,如此工作重复三次,以得到纯菌体。
六、酵母菌的鉴定
从猪粪和酒糟中共分离八株酵母菌,经鉴定共有种酵母菌,它们分别是皱褶假丝酵母、酿酒酵母、一东方伊萨酵母、团假丝酵母、热带假丝酵母、毛抱子菌属。从猪粪中分离两株酵母,分别是热带假丝酵母菌和毛抱子菌。这些分离出的酵母菌,除毛抱子菌外,其他都可以作为饲料酵母使用。
七、酵母菌发酵液的喷雾干燥。
