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2017/1/19 8:51:39 ELISA试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,参加板孔中的标本,其间的抗原并不是都有平等的和固相抗的机会,只需zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐,因此需经分散才干到达反响的结尾。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的也相同如此。这就是为何ELISA试剂盒反响老是需求必定时刻的温育。
有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液,再在其间参加血清标本,然后在微型震动器上震动1分钟以确保混和。加酶物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器,使加液进程敏捷完结。在ELISA检查试剂盒中通常有两次抗原抗体反响,即加标本和加酶物后。抗原抗体反响的完结需求有必定的温度和时刻,这一保温进程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA检查试剂盒中似不恰当。
ELISA试剂盒温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体的合适温度。在树立ELISA方法作反响动力学研讨时,实验标明,两次抗原抗体反响通常在37℃经1-2小时,产品的生成可达高峰。为加快
反响,可进步反响的温度,有些实验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为*,在放射免疫测定中多使反响在冰箱中,以形成zui多的沉积。但因所需时刻太长,在Elisa试剂盒中通常不予选用。