人抗丝集蛋白抗体（AFA）ELISA试剂盒说明书-化工仪器网-手机版

人抗丝集蛋白抗体（AFA）ELISA试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人抗丝集蛋白抗体（AFA）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于定性测定人血清，血浆及相关液体样本中抗丝集蛋白抗体（AFA）。
实验原理
本试剂盒采用间接法测定标本中人抗丝集蛋白抗体（AFA）。用纯化的丝集蛋白（AFA）抗原包被微孔板，制成固相抗原，与样品中抗丝集蛋白抗体（AFA）温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人抗丝集蛋白抗体（AFA）的存在与否。，
试剂盒组成

1
20倍浓缩洗涤液
50ml×1瓶
8
样品稀释液
6ml×1瓶

2
链霉亲和素-HRP
6ml×1瓶
9
阴性对照
0.5ml×1瓶

3
酶标包被板
12孔×8条
10
阳性对照
0.5ml×1瓶

4
生物素标记的抗-IgG抗体
6ml×1瓶
11
密封袋
1个

5
显色剂A液
6ml×1瓶
12
封板膜
3张

6
显色剂B液
6ml×1/瓶
13
说明书
1份

7
终止液
6ml×1瓶

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔

2.         加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育45分钟。
3.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。
5.         加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

6. 洗涤：操作同4。

7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
8. 洗涤：操作同4。

9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为人丝集蛋白抗体（AFA）阴性

阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为人丝集蛋白抗体（AFA）阳性

注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。