ABA ELISA试剂盒用于植物提取液ABA-化工仪器网-手机版

详细介绍：

用途：

ABA ELISA试剂盒用于植物提取液ABA 。本试剂盒可以检测天然和重组的ABA 。

本试剂盒于科研、而非用于临床诊断。

试验原理：

ABA 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ABA 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ABA 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ABA 的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份（2-8℃保存）	96孔配置	48孔配置	配制
96/48人份酶标板	1块板（96T）	半块板（48T）	即用型
塑料膜板盖	1块	半块	即用型
标准品：40nmol/L	1瓶（0.6ml）	1瓶（0.3ml）	按说明书进行稀稀
空白对照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）	即用型
标准品稀释缓冲液	1瓶（5ml）	1瓶（2.5ml）	即用型
生物素标记的抗ABA抗体	1瓶（6ml）	1瓶（3.0ml）	即用型
亲和链酶素-HRP	1瓶（10ml）	1瓶（5.0ml）	即用型
洗涤缓冲液	1瓶（60ml）	1瓶（30ml）	按说明书进行稀释
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）	即用型
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）	即用型
终止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）	即用型

自备材料

1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可*保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。

2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

试剂的准备

1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

40 nmol/L	（6号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
20 nmol/L	（5号标准品）	100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
10 nmol/L	（4号标准品）	100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
5.0 nmol/L	（3号标准品）	100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
2.5 nmol/L	（2号标准品）	100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
1.25 nmol/L	（1号标准品）	100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 nmol/L	（空白对照）	原始浓度不用稀释直接加入50ul。

2．洗涤缓冲液（20×）的稀释：蒸馏水20倍稀释。

操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育15分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案

标准品浓度（nmol/L）

样品

5.0

样品

2.5

样品

1.25

样品

结果分析

以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ABA 标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的ABA 含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1．灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2．特异性：不与人其它细胞因子反应。

3．重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

ABA ELISA试剂盒用于植物提取液ABA

相关产品

常用功能直达