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人MEK激酶酶联免疫检测ELISA

上海逸峰生物科技有限公司

2010/12/1 9:24:58

                                          人MEK激酶联免疫检测

试剂盒使用说明书

 

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测人MEK激酶,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

 

用途:    用于人血清、血浆及相关液体样本中MEK激酶的测定。本公司专业供应Elisa试剂盒,*,*,可免费提供代测服务,咨询:  :

 

工作原理

本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人MEK激酶的水平。向预先包被了人MEK激酶克隆抗体的酶标孔中加入MEK激酶,温育;洗涤后,加入HRP标记过的MEK激酶抗体。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物AB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中人MEK激酶的浓度呈正相关。

试剂盒组成

1

标准品(480pmol/L

0.5ml

7

显色剂A

3ml

2

标准品稀释液

3ml

8

显色剂B

3ml

3

酶标包被板

12孔×4

9

终止液

3ml

4

酶标试剂

3ml

10

说明书

1

5

20倍浓缩洗涤液

20ml

11

封板膜

2

6

样品稀释液

3ml

12

密封袋

1

需要而未提供的试剂和器材

1.   37℃恒温箱。

2.   标准规格酶标仪。

3.   精密移液器及一次性吸头

4.   蒸馏水,

5.   一次性试管

6.   吸水纸

注意事项

1.   2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.   各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3.   建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

4.   严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

5.   为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜

6.   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.   底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

 

标本要求

1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

操作程序

1.   标准品的稀释(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明在小试管中自行倍比稀释):

240pmol/L

5号标准品)

120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液

120pmol/L

4号标准品)

120μl5号标准品加入120μl的标准品稀释液

60pmol/L

3号标准品)

120μl4号标准品加入120μl的标准品稀释液

30pmol/L

2号标准品)

120μl3号标准品加入120μl的标准品稀释液

15pmol/L

1号标准品)

120μl2号标准品加入120μl的标准品稀释液

2.   分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。轻轻晃动混匀,37温育30分钟。  

3.   弃去液体,甩干,每孔加满30倍稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

4.   每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37温育30分钟。  

5.   弃去液体,甩干,每孔加满30倍稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

6.   每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色10分钟.

7.   取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.   测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

9.   根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

操作程序总结

准备试剂,样品和标准品

 

 

加入准备好的样品和标准品,37反应30分钟

 

 

洗板5次,加入酶标试剂,37反应30分钟

 

洗板5次,加入显色液AB37显色10分钟

 

加入终止液

 

15分钟之内读OD

 

计算

 

检测范围:10pmol/L→300pmol/L

规格:    48T/

保存:    2-8

有效期:  6个月(2-8℃)。

上海逸峰生物科技有限公司代理不同品牌价格档次的ELISA试剂盒。数万种抗体产品等, 品种多,质量好,灵敏度高,价格实惠,并且还提供免费代检测服务。

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