ELISA试剂盒标准操作步骤

             ELISA试剂盒规范操作过程

优异的试剂，良好的仪器和的操作是确保ELISA 检查结果牢靠的必要条件，ELISA 顶用的蒸馏水或去离子水，包含用于洗刷的，应为新鲜的高质量的纯化水电导率小于1.5μs/cm。

1、加样
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不行溅起。
2、保温
在树立ELISA 办法作反响动力学研讨时，实验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经
1-2 小时，商品的生成可达高峰。为避免蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，反响板不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。应留意温育的温度和时刻应按规则力求。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完结，选用水浴会形成值偏高或花板。别的温育中还有边际效应，边上的值会偏高，主张为了客观的判别结果，将质控放在非边际方位。
3、洗刷
洗刷在ELISA 过程中虽不是一个反响过程，但却决议着实验的成败。ELSIA 即是靠洗刷来到达分离游离的和联络的酶符号物的目的。经过洗刷以铲除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体联络的物质，以及在反响过程中非特异性地吸附于固相载体的搅扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗刷时应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。可以说在ELISA 操作中，洗刷是zui首要的关键技术，应导致操作者的高度重视，操作者应严厉按请求洗刷，不得大意。
洗刷液多为含非离子型洗刷剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的联络是疏水性的，非离子型洗刷剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键联络，然后削弱蛋白质与固相载体的联络，并借助于亲水基团和水分子的联络作用，使蛋白质回复到水溶液状态，然后脱离固相载体。洗刷液中的非离子型洗刷剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低实验的灵敏度。
洗板时留意各种试剂盒的洗液不要混用。假如洗液需求稀释，应按请求稀释，所用的水电导率在1.5us/cm 之下，洗液假如结晶应待其融解后制造。确保洗板浸泡时刻为40 秒左右，孔内液体被洗板机吸收得越洁净洗刷作用非常好，手艺洗板避免洗液在孔内形成气泡。
 

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