食品中四种甜味剂的测定方法液相色谱法
1 范围
本标准参照DB13/T 1112-2009规定了食品中乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜的测定方法。本标准适用于饮料中乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜的测定。本方法乙酞磺胺酸钾的检出限为0.05ug/mL；糖精钠的检出限为0.05ug/mL；环己基氨基磺酸钠的检出限为2.0ug/mL；阿斯巴甜的检出限为0.05ug/mL;
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的版本。凡是不注日期的引用文件，其版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验用水规格和试验方法
3 原理
样品中甜味剂在酸性溶液中以阴离子形式，选用含有类离子对试剂（tris)的甲醇水溶液作流动相，采用反相离子对液相色谱法分离，根据色谱峰的保留时间定性，根据峰高或峰面积定量。
4 试剂
除另有规定，所有试剂均为分析纯，为GB/T6682规定的一级水。
4.1甲醇：色谱纯。
4.2稀氨水（(1+1):氨水加水等体积混合。
4. 3 Tris储备液（(0. 5mol/L）：称取6.057g三（羟甲基）氨基甲烷溶于超纯水中定容到100mL,混合均匀。
4.4乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜标准品：纯度≥99%。
4.5乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜标准储备溶液：精密秤取乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0.1000g，用超纯水溶解稀释至10mL；环己基氨基磺酸钠1.0000g，用超纯水溶解稀释至10mL；阿斯巴甜0.1000g用1:1甲醇水溶液溶解稀释至10mL；阿斯巴甜、乙酞磺胺酸钾、糖精钠浓度分别为：10.0mg/mL；环己基氨基磺酸钠浓度为：100.0mg/mL：于冰箱保存。
4.6混合标准使用溶液：取一定量上述标准储备液混合，用超纯水逐级稀释，配成乙酞磺胺酸钾，糖精钠，阿斯巴甜为1.0mg/mL的混合标准使用液，环己基氨基磺酸钠浓度为10.Omg/mL的标准使用液。
4. 7混合标准使用系列溶液：准确吸取混合标准使用液0. 00mL, 0. 05mL, 0. 10mL, 0. 20mL, 0. 40mL, 0. 60mL，环己基氨基磺酸钠标准使用液0. 00mL, 0. 10mL, 0. 50mL, 1. 0mL, 2. 0mL, 4. 0mL加超纯水定容至10mL，配成标准系列。其中，乙酞磺胺酸钾、阿斯巴甜、糖精钠其浓度为0.0ug/mL,5.0ug/mL, 10.0ug/mL, 20.0ug/mL, 40.0ug/mL, 60.0ug/mL，环己基氨基磺酸钠浓度0.0mg/mL,0.1mg/mL,0.5mg/mL,1.0mg/mL,2.0mg/mL,4.0mg/mL，置于冰箱冷藏保存。
5 仪器
5.1液相色谱仪（501液相色谱仪），UV-501紫外检测器。
5.2超声波清洗器、AP-01无油真空泵。
5.3离心机。
5.4抽滤瓶。
5. 5微孔滤膜：0.45nm。
5.6电子天平：感量0.0001g和0.01 g。
6 分析步骤
6.1样品处理：
称取5.0g-10.0g（到0.01g)试样，用氨水（1+1)调pH至7，加水定容至适当体积，离
心沉淀，上清液经45u m滤膜过滤，滤液作HPLC分析用。
6. 2测定
6.2.1 HPLC参考条件
分析柱：VertexC18色谱柱，4.6mmx250mm粒度5um
流动相：甲醇：5mmol/LTris缓冲溶液（pH4.5）=5: 95。
波长：205nm。
流速：1.2 mL/min。
柱温：25℃
6.2.2标准曲线：分别进样阿斯巴甜、乙酞磺胺酸钾、糖精钠和环己基氨基磺酸钠标准系列溶液各10uL，进行HPLC分析，然后以峰面积为纵坐标，以四种甜味剂的含量为横坐标，绘制标准曲线。
6.2.3试样测定：吸取6.1处理后的试样溶液10uL进行HPLC分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中四种甜味剂的含量
7 结果计算
试样中甜味剂成分的含量按下式计算：
X=cxVxl000/m x 1000
式中：
X-试样中甜味剂成分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg);
c-由标准曲线上查得进样液中甜味剂成分的量，单位为微克每毫升(ug/mL);
V-试样稀释液总体积，单位为毫升（mL);
m-试样质量，单位为克（g)
计算结果保留两位有效数字。
8 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的差值不得超过算术平均值的10%.
1．乙酞磺胺酸钾（acesulfame-K);
2．阿斯巴甜(aspartame) ;
3．环己基氨基磺酸钠（sodiumcyclamate) ;
4.糖精钠（sodiumsaccharina)
