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常见问题之样本处理

上海恒远生化试剂网

2017/3/15 11:22:26

    用ELISA检测样本的种类非常多,但是不同类型的样本前期的处理也是不一样的,正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的*步,下面简单的介绍几种样本的处理方法。

血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过一夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。  

血浆: 应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,于1000×g离心15分钟,仔收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 

尿液: 用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 

细胞上清液:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(1000×g)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心10分钟左右(5000×g)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。  

组织样本: 用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g?离心5~10分钟,取上清检测。  

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