制备单克隆抗体动物的选择与免疫

1．动物的选择 纯种BALB／C小鼠较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALB／C小鼠。
2．免疫方案 免疫方案应根据抗原的特性不同而定，选择合适的免疫方案对细胞融合杂交的成功，并获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫。对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是对于初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1．0X107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加*福氏佐剂并经充分乳化。如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用于动物免疫。
（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂有福氏*佐剂、福氏不*佐剂，方法如下。
初次免疫 抗原l～50pg加福氏*佐剂
皮下多点注射或脾内注射
（一般0．8～1ml，0．2ml／点）
↓3周后
第2次免疫 剂量同上，加福氏不*佐剂
皮下或腹腔内注射
（腹腔内内注射，腹腔内注射剂量不宜超过0．5m1）
↓3周后
第3次免疫 剂量同上，不加佐剂，腹腔内注射
（5～7d后采血测其效价）
↓2—3周
加强免疫，剂量50～500~g为宜
腹腔内注射或静脉内注射
（静脉内注射）
↓3d后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也在不断更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为（1～2）X107个细胞。
初次免疫1X107／0．5ml腹腔内注射
↓2～3周后
第2次免疫lXl07／0．5ml腹腔内注射
↓3周后
加强免疫（融合前3d）lXl07／0．5ml
腹腔内注射或静脉内注射
取脾融合
免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动物、抗原形式、免疫途径不同而异，以获得价抗体为zui终目的。免疫间隔一般2—3周。一般被免疫动物的血清抗体效价越高，融合后细胞产生价特异抗体的可能性越大，而且单克隆抗体的质量（如抗体的浓度和亲和力）也与免疫过程中小鼠血清抗体的效价和亲和力密切相关。末次免疫后3～4d，可分离脾细胞融合。