ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法

问  题

可能的原因

解决方法

1．非常弱的结果

（1）温育的时间或温度不够；

校正温育箱温度；校正定时钟准

（2）显色反应时间太短；

确定时；使用新鲜合格的蒸馏水；

（3）所用配制缓冲液的蒸馏水有问题；

按照说明书保存试剂盒和准确配

（4）加入抗体/酶的稀释液浓度太低；

制工作液；试剂室温平衡至少 20

（5）酶标仪滤光片不正确；

分钟，确保所有试剂已平衡至室

（6）不正确的试剂储存方式；

温（约 25℃）；校正移液器，吸

（7）试剂盒没有充分平衡；

嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸

（8）移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂

   水太多或内壁不清洁。

嘴内壁要清洁，一次性使用。

2．标准曲线和测定的重复性差

这是典型的由测定操作引起的问题，包括

重复某一样品时，加样时间尽可

（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致；

能与*次接近；重复测定标本，

（2）加样过快，孔间发生污染；

操作条件、人员等应尽可能与上

（3）加错样本；

次保持一致，以排除这些因素造

（4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非

   包被区；

成的不一致的可能性；样品稀释

（5）不同批号试剂盒中组分混用；

（6）温育时间、洗板、显色时间不一致；

前应充分混匀；尽可能使用同一

（7）孔内污染杂物；

移液器并装紧吸嘴。

（8）酶标仪滤光片不正确；

（9）试剂/样品没有混匀；

（10）血清标本未*凝固即加入，

   反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留

   血细胞，易出现假阳性反应等。

3．白板（阳性对照不显色）

（1）漏加酶结合物；

请按说明书所示稀释倍数配制；

（2）洗板液配制中出现问题，

   如量筒不干净，含酶抑制物（如叠

   氮钠）等；

注意不要漏加；每次加液前均应

（3）添加的试剂错误或者被遗漏；

核对标签。

（4）试剂过期；

4．空白背景高

（1）洗板不干净；

浓缩洗液准确配制；50 倍浓缩洗

（2）显色液变质；

涤液如有结晶则应让结晶于室温

（3）试剂过期；

全部溶解后再量取稀释；充分洗

（4）不正确的试剂稀释液，如加酶的

   浓度过高；

涤，*拍干；加样或加酶拍板

（5）蒸馏水受酶等污染；

的滤纸应弃去不用，不要反复使

（6）试剂混用；

用，否则易造成污染；吸嘴尽可能一次性使用；使用新鲜蒸馏水；不同批号试剂勿混用；请按说明书所示稀释倍数配制；显色反应时间适当缩短。

（7）培养箱温度超过 37℃或反应时

   间过长。