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西美杰*病毒包装方案:五大流程,一个对策!

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2018/1/24 11:30:26

西美杰*病毒包装方案:五大流程,一个对策!

     不论是细胞治疗还是基因治疗都离不开病毒载体。目前使用zui多的病毒载体类型包括:腺相关病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆转录病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,这些常用病毒载体特性如下图所示:

特征

慢病毒
Lentivirus

逆转录病毒
Retrovirus

腺相关病毒
AAV

腺病毒
ADV

基因表达

稳转/瞬转

稳转

瞬转

瞬转

是否能感染可分裂的细胞

是否能感染不分裂的细胞

是否能整合到靶细胞基因组

靶细胞的免疫反应

较低

非常低

病毒滴度

+++

++

+++

++++

转染效率

+++

++

+++

++++



因此在选择病毒载体时,除了要考虑载体自身特征之外,如何包装并获取高滴度高活性的病毒载体对后续实验至关重要,针对病毒载体制备5大环节,小美为您推荐如下解决方案↓



1. 病毒载体包装质粒系统
西美杰代理的美国Cell Biolabs公司推出的病毒包装系统可满足多种重组病毒包装需求,包括四大类型病毒包装质粒AAV Helper Free System、ViraSafe™ Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。更多病毒包装质粒系统介绍请点这里。

 

2. 病毒包装试剂

A. 病毒包装转染试剂
西美杰代理的美国Mirus公司新推出的病毒包装转染试剂TransIT®-VirusGEN™与TransIT®-Lenti系列,专门针对AAV和Lentivirus设计,相比传统转染方法能获得更高的转染效率和病毒滴度,无动物源成分且兼容多种病毒包装系统及不同细胞系类型。

品名

货号

规格

适用病毒类型

TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent

MIR 6703

0.3/0.75/1.5mL

AAV & Lentivirus

TransIT®-Lenti Transfection Reagent

MIR 6603

0.3/0.75/1.5mL

Lentivirus

 

B. Lv/Rv包装效率增强剂Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰*代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重组慢病毒或逆转录病毒包装过程,可促进病毒基因组转录和RNA稳定,使转染效率提高10倍左右。

品名

货号

规格

适用病毒类型

Lentivirus 10X Titer-Up

P906

1 mL

Lentivirus

Retrovirus 10X Titer-Up

P909

1 mL

Retrovirus

 

C. AAV/Adv病毒释放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰*代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款无需反复冻融,即可从细胞中快速收获AAV/Adv病毒以及其他非分泌型无囊膜病毒的试剂。

品名

货号

规格

适用病毒类型

Virus-High® AAV / Adv Release Solution

P900

10 mL

AAV & Adv

 

3. 快速病毒浓缩试剂与纯化试剂盒
西美杰*代理的美国Cali-bio和Cell Biolabs品牌专门针对病毒载体设计的重组病毒浓缩纯化试剂(盒),在获得重组病毒高回收率的同时大大简化操作流程,无需超速离心设备,是中小规模样本纯化的方案。

重组病毒类型

品名

货号

特点

逆转录病毒
(Retrovirus)

Retrovirus Concentration Solution(5×)
逆转录病毒浓缩试剂

CB300904

无需超速离心;
1小时内病毒浓缩10-100倍;
浓缩后病毒适用于各种细胞;

慢病毒
(Lentivirus)

Lentivirus Concentration Solution(5×)
慢病毒浓缩试剂

CB300905

ViraBind™ Lentivirus Purification Kit

VPK-104

操作时间< 2h,无需超速离心;

回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当

腺相关病毒
(AAV)

ViraBind™ AAV Purification Kit
(适用样本量为2个10cm皿或1个15cm皿收获的上清)

VPK-140

适用于纯化AAV-2与AAV-DJ;
操作时间约3h;

ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
(一次处理样本量可达10个15cm皿收获的上清)

VPK-141

获得AAV纯度>95%,回收率>60%

腺病毒
(ADV)

ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit
(适用样本量为1个T75瓶或1个10cm皿收获的上清)

VPK-099

采用特殊滤膜和离心柱;
操作时间约30min,无需超速离心;

ViraBind™ Adenovirus Purification Kit
(适用样本量约为4个T75瓶收获的上清)

VPK-100

回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当

 

4. 病毒滴度检测试剂盒
测定重组病毒滴度是提高下游实验可控性,重复性和准确性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌针对不同病毒载体的特性分别设计的了多种滴度测定试剂盒,并且兼容了和的测定方法。

重组病毒类型

品名

货号

特点

慢病毒
(Lentivirus)

Lentivirus Rapid Quantitation Kit

VPK-112

快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测;
灵敏度:1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清

Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit

VPK-107

Pull-down技术分离出病毒相关P24蛋白,去除游离P24蛋白;
ELISA方法定量有活性的重组慢病毒滴度,避免传统方法检测总P24蛋白导致的误差

Traditional p24 ELISA Kit

VPK-108-H

ELISA方法检测总P24蛋白定量慢病毒滴度

逆转录病毒
(Retrovirus)

QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit

VPK-120

快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测;
灵敏度:1.5×109个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清

腺相关病毒
(AAV)

QuickTiter™ AAV Quantitation Kit

VPK-145

快速定量,操作过程<2h;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度;
灵敏度:纯化前AAV可达109 GC/mL,对于纯化后AAV可达5×1010 GC/mL

腺病毒
(ADV)

QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit

VPK-106

快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测;
灵敏度:1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清

QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

VPK-109

无需空斑形成实验,避免复杂的铺琼脂步骤,操作更简便;
传统方法10天才可完成的实验,用该试剂盒仅需2.5天,有ELISA和ICC两种方法供选择;

QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit

VPK-110

可用于所有41个血清型的腺病毒



5. 病毒感染增强试剂
西美杰代理的Cell Biolabs品牌还针对不同病毒载体研发了促病毒感染试剂,能显著提高病毒对靶细胞的感染,进而提高基因表达效率。

品名

货号

规格

特点

ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit

LTV-200

40 次

复合型试剂能与慢病毒或逆转率病毒形成复合物,与Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,适用于原代细胞和干细胞

LTV-201

200次

ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit

RV-200

40次

RV-201

200次

ViraDuctin™ AAV Transduction Kit

AAV-200

10次

有效提高重组AAV在多种细胞内的转染效率,包括传统方法转导效率低的细胞和非分裂细胞,如原代细胞和干细胞。该试剂使用方便,仅需2h,是AAV转染非分裂细胞的。

AAV-201

50次

ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent

AD-200

10次

该试剂让重组腺病毒感染不依赖于细胞的CAR(柯萨奇病毒-腺病毒受体)水平,可显著提高病毒感染低CAR或无CAR表达的细胞,如原代细胞或干细胞,还可提高转入基因的表达效率

AD-201

50次

 

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