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2018/1/24 11:30:26西美杰*病毒包装方案:五大流程,一个对策!
不论是细胞治疗还是基因治疗都离不开病毒载体。目前使用zui多的病毒载体类型包括:腺相关病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆转录病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,这些常用病毒载体特性如下图所示:
特征 | 慢病毒 | 逆转录病毒 | 腺相关病毒 | 腺病毒 |
基因表达 | 稳转/瞬转 | 稳转 | 瞬转 | 瞬转 |
是否能感染可分裂的细胞 | 是 | 是 | 是 | 是 |
是否能感染不分裂的细胞 | 是 | 是 | 否 | 否 |
是否能整合到靶细胞基因组 | 是 | 是 | 否 | 否 |
靶细胞的免疫反应 | 低 | 较低 | 非常低 | 高 |
病毒滴度 | +++ | ++ | +++ | ++++ |
转染效率 | +++ | ++ | +++ | ++++ |
因此在选择病毒载体时,除了要考虑载体自身特征之外,如何包装并获取高滴度高活性的病毒载体对后续实验至关重要,针对病毒载体制备5大环节,小美为您推荐如下解决方案↓
1. 病毒载体包装质粒系统
西美杰代理的美国Cell Biolabs公司推出的病毒包装系统可满足多种重组病毒包装需求,包括四大类型病毒包装质粒AAV Helper Free System、ViraSafe™ Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。更多病毒包装质粒系统介绍请点这里。
2. 病毒包装试剂
A. 病毒包装转染试剂
西美杰代理的美国Mirus公司新推出的病毒包装转染试剂TransIT®-VirusGEN™与TransIT®-Lenti系列,专门针对AAV和Lentivirus设计,相比传统转染方法能获得更高的转染效率和病毒滴度,无动物源成分且兼容多种病毒包装系统及不同细胞系类型。
品名 | 货号 | 规格 | 适用病毒类型 |
TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent | MIR 6703 | 0.3/0.75/1.5mL | AAV & Lentivirus |
TransIT®-Lenti Transfection Reagent | MIR 6603 | 0.3/0.75/1.5mL | Lentivirus |
B. Lv/Rv包装效率增强剂Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰*代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重组慢病毒或逆转录病毒包装过程,可促进病毒基因组转录和RNA稳定,使转染效率提高10倍左右。
品名 | 货号 | 规格 | 适用病毒类型 |
Lentivirus 10X Titer-Up | P906 | 1 mL | Lentivirus |
Retrovirus 10X Titer-Up | P909 | 1 mL | Retrovirus |
C. AAV/Adv病毒释放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰*代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款无需反复冻融,即可从细胞中快速收获AAV/Adv病毒以及其他非分泌型无囊膜病毒的试剂。
品名 | 货号 | 规格 | 适用病毒类型 |
Virus-High® AAV / Adv Release Solution | P900 | 10 mL | AAV & Adv |
3. 快速病毒浓缩试剂与纯化试剂盒
西美杰*代理的美国Cali-bio和Cell Biolabs品牌专门针对病毒载体设计的重组病毒浓缩纯化试剂(盒),在获得重组病毒高回收率的同时大大简化操作流程,无需超速离心设备,是中小规模样本纯化的方案。
重组病毒类型 | 品名 | 货号 | 特点 |
逆转录病毒 | Retrovirus Concentration Solution(5×) | CB300904 | 无需超速离心; |
慢病毒 | Lentivirus Concentration Solution(5×) | CB300905 | |
ViraBind™ Lentivirus Purification Kit | VPK-104 | 操作时间< 2h,无需超速离心; | |
回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当 | |||
腺相关病毒 | ViraBind™ AAV Purification Kit | VPK-140 | 适用于纯化AAV-2与AAV-DJ; |
ViraBind™ AAV Purification Mega Kit | VPK-141 | 获得AAV纯度>95%,回收率>60% | |
腺病毒 | ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit | VPK-099 | 采用特殊滤膜和离心柱; |
ViraBind™ Adenovirus Purification Kit | VPK-100 | 回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当 |
4. 病毒滴度检测试剂盒
测定重组病毒滴度是提高下游实验可控性,重复性和准确性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌针对不同病毒载体的特性分别设计的了多种滴度测定试剂盒,并且兼容了和的测定方法。
重组病毒类型 | 品名 | 货号 | 特点 |
慢病毒 | Lentivirus Rapid Quantitation Kit | VPK-112 | 快速定量,操作过程45-60min; |
Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit | VPK-107 | Pull-down技术分离出病毒相关P24蛋白,去除游离P24蛋白; | |
Traditional p24 ELISA Kit | VPK-108-H | ELISA方法检测总P24蛋白定量慢病毒滴度 | |
逆转录病毒 | QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit | VPK-120 | 快速定量,操作过程45-60min; |
腺相关病毒 | QuickTiter™ AAV Quantitation Kit | VPK-145 | 快速定量,操作过程<2h; |
腺病毒 | QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit | VPK-106 | 快速定量,操作过程45-60min; |
QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit | VPK-109 | 无需空斑形成实验,避免复杂的铺琼脂步骤,操作更简便; | |
QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit | VPK-110 | 可用于所有41个血清型的腺病毒 |
5. 病毒感染增强试剂
西美杰代理的Cell Biolabs品牌还针对不同病毒载体研发了促病毒感染试剂,能显著提高病毒对靶细胞的感染,进而提高基因表达效率。
品名 | 货号 | 规格 | 特点 |
ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit | LTV-200 | 40 次 | 复合型试剂能与慢病毒或逆转率病毒形成复合物,与Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,适用于原代细胞和干细胞 |
LTV-201 | 200次 | ||
ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit | RV-200 | 40次 | |
RV-201 | 200次 | ||
ViraDuctin™ AAV Transduction Kit | AAV-200 | 10次 | 有效提高重组AAV在多种细胞内的转染效率,包括传统方法转导效率低的细胞和非分裂细胞,如原代细胞和干细胞。该试剂使用方便,仅需2h,是AAV转染非分裂细胞的。 |
AAV-201 | 50次 | ||
ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent | AD-200 | 10次 | 该试剂让重组腺病毒感染不依赖于细胞的CAR(柯萨奇病毒-腺病毒受体)水平,可显著提高病毒感染低CAR或无CAR表达的细胞,如原代细胞或干细胞,还可提高转入基因的表达效率 |
AD-201 | 50次 |
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