北京欣兴强森生物科技有限公司
2018/1/30 16:03:011.离心概述
1.1离心原理
在离心力作用下,混合物质由于密度差异而沉积分离。离心时间由物质的密度和施加的离心力决定
>密度越大,越快沉降到达管底(密度=质量/体积)
>离心力越大,离心分离时间越短
离心分离按照应用可分为离心沉降和离心过滤两种
离心沉降 利用悬浮液(或乳浊液)密度不同的各组分在离心力场中迅速沉降分层的原理,实现液-固或液-液(相)分离。日常实验应用有沉淀离心、密度梯度离心、等密度梯度离心等。
>沉淀离心 是离心机zui常见的应用,即通过离心使固体集聚沉淀在离心管底部从而与液体(上清液)分开。在相分离的过程中。溶质从而分散状态或者溶液介质中转移到另一种溶剂中(来进行化学/分子生物学分析)。
>等密度梯度离心 是指在离心力场下,在密度梯度介质中,颗粒移动到与它们各自的密度恰好相等的位置,形成一系列密度区,从而使不同密度的物质得到分离。
离心过滤 使悬浮液在离心力场下产生的离心压力,作用在过滤介质上,使液体通过过滤介质成为滤液,而固体颗粒被截留在过滤介质表面,从而实现液-固分离。例如超滤膜离心分离纯化大分子物。
1.2离心参数
对于一台离心机来说比较重要的一下参数:相对离心力/转速、K因子、离心时间、温度等
1.2.1 相对离心力/转速
离心机通过离心力分离样品,加速度和转速是非常重要的参数。其中加速度是相对于地球表面的重力加速度g(9.81m/s²)而设置的。离心效果主要由相对离心力(rcf)来衡量。相比于每分钟转速(rpm),相对离心力更。
相同转速(rpm)的转子,离心半径不同可以形成不同的相对离心力(rcf)。
以MiniSpin plus和5430R为例,同样装载1.5ml离心管,并以同样转速14000rpm离心。根据上图公式,得到两台离心机的离心力分别为13100×g和20817×g,产生不同离心效果。
由此可见,转速相同的情况下,离心半径不同的转子有不同的相对离心力。
Tips:除了MiniSpin之外,Eppendorf所有的离心机都可以实现离心力和转速的自动转换。
1.2.1 K因子和时间(t)
K因子主要由转子决定。在离心过程中,它影响离心所需要的沉降时间(t)。一般而言,它是离心管中沉降距离的一个量度标准。在离心管中,离心分离所需的时间(t)与沉降距离成正比。K因子取决于转子中离心管的角度和使用的离心管类型。
K因子越小,意味着离心分离所需的时间越短,K因子还受转速的影响,转速越高,分离所
需的时间越短
通过计算两个转子的K因子,可以直接比较两个转子离心分离过程的相对转速,K因子越小表明离心分离所需时间越短。
K因子和离心时间成正比:
如何选择离心机
离心前请确保与参考实验方案使用相同类型的转子、相同的相对离心力、离心温度以及离心时间。总的来说,要想成功离心,主要参数一下参考:
>样品类型 >适配器类型
>离心耗材 >相对离心力
>离心机种类 >离心所需温度
>转子类型