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都在问:利用什么方程拟合ELISA曲线较合适?

上海沪鼎生物科技有限公司

2018/4/26 11:17:56

    日前上午,有位客户我公司“在线客服”中到我司业务员夏,客户表示在五月初有个实验项目,需要订购人IRAK试剂盒,对实验曲线问题作出疑问。对此,夏将问题转至技术部,技术员给夏去解析:利用什么方程拟合ELISA曲线较合适?
   

    用于免疫检测的所谓“标准曲线”其实称为拟合曲线比较合适。免疫检测时标准点(可以是倍比稀释的,也可以不是)浓度如果和相应的吸光度(OD)值如果能够呈现直线关系当然是的了,这时可以通过EXELL等方便的获得拟合曲线,进而推算出样品的浓度值。但我们做免疫检测很少有时候能够有这么理想的情况,标品浓度和相应OD值往往是"S"型的曲线关系,这时就不能用直线拟合的方式了,而对拟合方法进行选择就是必要的了。
   

    关于标准曲线的拟合方式,直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合,但都只适用于曲线的一部分,有的适用于前半段,有的适用于后半段,有的适用于中间一段,而Logistic曲线则对曲线的全部都有较好的适用性。当然,如果用于定量,还是在中间一段较好。这些方法虽然没有一种方法可以通用,但也都可以用。关键在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分,你想检测的样品浓度在曲线的哪一部分。在S曲线的低浓度部分可以用乘幂方程很好的拟合,中低浓度部分可以用直线方程,中间部分可用对数方程,而中后段可用四参数。
   

    目前上zui流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合”,用这种拟合方式往往能够比较的反映浓度和吸光度的曲线关系,从而进一步比较正确的获得样品中待测物质的浓度值。
   

    其实,在一个长的区间内,Logistic应该都能拟合得较为理想。但并不是说它就是的。事实上不仅是ELISA,其它很多生物学反应都是S形曲线,也都可以用Logistic曲线拟合。但建模型是一回事,而用它来定量是另一回事。如果用来定量,S形曲线的中间段(较陡处)是比较好的,而两端的平坦部分计算误差会大,有时甚至会很大。
   

    上海沪鼎生物科技有限公司提供全程技术指导服务,咨询了解更多相关ELISA技术资讯,欢迎您我司业务员夏。 

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