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大鼠超氧化物歧化酶操作步骤

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2011/3/24 18:31:28

大鼠超氧化物歧化酶操作步骤

1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

80U/mL

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

40U/mL

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

20 U/mL

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

10 U/mL

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

5 U/mL

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3。

8.         洗涤:操作同5。

9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结:

1.准备试剂,样品和标准品

2.加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟;

3.洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟;

4.洗板5次,加入显色液A、B,37℃反应10分钟;

5.加入终止液;

6.15分钟之内度OD值;

7.计算。

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