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人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)ELISA试剂盒操作步骤

南京森贝伽生物科技有限公司

2018/8/13 11:48:00

本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。用纯化的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被抗原的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),再与HRP标记的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度。

 

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:270μg/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

 

样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

注意事项:

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

标准曲线图计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      

倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

倍数,即为样品的实际浓度。                 

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

检测范围:                                              

10μg/L -200μg/L                                                                 

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:;2-8

2.有效期:6个月

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