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2018/12/3 16:30:21土壤纤维素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
测定原理:
采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允许快递)
和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:甲苯10mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:液体6mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存; 临用前加入5mL 蒸馏水和45mL 浓硫酸充分溶解待用。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干,过30~50 目筛。
加样表和测定步骤:
对照管 测定管
风干土样(g) 0.1 0.1
试剂一 (μL) 100 100
振荡混匀15min
试剂二(μL ) 180
试剂三(μL ) 740 740
蒸馏水(μL ) 360 180
37℃振荡反应3h 后,90℃水浴15min(盖紧,防止水分散失),冷却后
8000g 25℃离心10min,取上清,得糖化液
糖化液 (μL) 350 350
试剂四 (μL) 650 650
混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,620nm 处蒸馏水调零,测定吸光值
A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
S-CL 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL 活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)
T:反应时间,3h=1/8d; V 反总:反应体系总体积:1.2mL;W:样本质量,0.1g。