非洲猪瘟病毒实时荧光 PCR 检测试剂盒说明书【兽药名称】通用名：非洲猪瘟病毒实时荧光 PCR 检测试剂盒商品名：无英文名称：African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit汉语拼音：Feizhouzhuwen Bingdu Shishiyingguang PCR Jianceshijihe【主要成分与含量】产品组份规格（48 头份/盒） 样品裂解液3 管（4 mL/管）荧光 PCR 反应液1 管（1.2 mL/管）阳性对照1 管（500 μL/管）阴性对照1 管（500 μL/管）说明书1 份【作用与用途】 用于猪全血、血清、淋巴结、脾脏、肌肉等样本中的非洲猪瘟病毒的检测。【用法与判定】1用法1.1样品采集1.1.1全血：直接取动物新鲜血液 200 µL 备用。1.1.2组织样品：取脾脏、淋巴结、肌肉等组织约 1 g，剪碎后取 0.1 g 进行充分研磨，随后加入 1.5 mL 生理盐水进行匀浆，将此样本转移至 1.5 mL 离心管中，8000 g 离心 2 min， 取上清液备用。1.2样品处理1.2.1取需要数量的离心管（需设置阳性对照及阴性对照），均加入样品裂解液 190 µL；1.2.2分别加入采集的待检样品（全血、组织样品等）、阳性对照、阴性对照各 10 µL，充分混匀；1.2.3瞬时离心，取上清液备用。1.3PCR 操作步骤1.3.1取出试剂盒，从中取出实验所需试剂，融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着的液体；1.3.2在各 PCR 管中分别加入 20 μL 荧光 PCR 反应液，转移至样本准备区；1.3.3分别加入 1.2.3 步骤获得的上清液 5 μL，混匀，瞬时离心，转移至检测区；1.3.4将各 PCR 管放置在仪器样品槽相应位置，并记录放置顺序；1.3.5按下表设置仪器核酸扩增相关参数，进行 PCR 扩增。 体系25 μL 反应体系信号通道FAM 通道采集荧光信号。PCR反应条件阶段条件循环数预变性95℃ ：3 min1PCR95℃ ：10 s4060℃ ：20 s2结果判定2.1实验成立条件2.1.1阳性对照：Ct 值≤30，有明显指数增长，呈典型的 S 型曲线。2.1.2阴性对照：Ct 值＞38 或无 Ct 值，无明显指数增长期和平台期。2.2判定标准2.2.1阳性：样本检测结果 Ct 值≤33，有明显指数增长，表明样本中检测出该病毒。2.2.2可疑：样本检测结果 Ct 值在 33~38 范围，应对样本进行复检。如重复实验结果 Ct 值仍在 33~38 范围，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。2.2.3阴性：样本检测结果 Ct 值＞38 或无 Ct 值，表明样本中未检测出该病毒。【注意事项】（1）实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按操作步骤执行。（2）所有试剂应在规定的温度储存，详细信息见试剂标签。（3）为了避免交叉污染，请尽可能在无核酸酶的环境下操作，并将试验过程分区进行（样本准备区、扩增检测区等）。（4）配制 PCR 反应体系时应尽量避免气泡产生，扩增前应检查反应管是否盖紧，以免反应液泄漏污染仪器。（5）本试剂盒可搭配标准核酸提取方法进行样品检测，Ct 值等判定参数不变。（6）为保证实验结果准确，样品应为新鲜采集，2-8℃运输，长途运输请使用干冰。（7）所有试剂应避免反复冻融。【贮藏与有效期】 ﹣20℃冷冻避光贮存，有效期为 12 个月。【规格】 48 头份/盒
