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2019/4/10 9:14:00商品货号:QS1007
英文名称:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
别名:乙醇脱氢酶试剂盒 ADH Kit 乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒
检测方法:常量法
商品货号: | 商品品牌: | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
---|---|---|---|---|
QS1007-50管/48样 | 50管/48样 | ¥280.00元 |
测定意义:
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理:
ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。
货号: QS1007 规格:50管/48样
乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性测定试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理:
ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。
自备实验用品及仪器:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1瓶,室温保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。临用前把试剂三转移到试剂二中,4℃保存。
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存。
试剂四:液体×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
3、血清等液体:直接测定。
ADH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
计算公式:
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(Cpr×V样)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/g鲜重) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/104cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/mL) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷V样÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管)
ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。
注意事项:
辅酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
QS1001 | 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
MS1001 | 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
MS1005 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
QS1007 | 醇脱氢酶(ADH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
MS1007 | 醇脱氢酶(ADH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
MS1009 | 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |