ELISA检测，按照试剂说明书要求，每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照：
1.空白对照：仅用稀释液代替检测样本、用以观测zui终反应的显色“本底”、并用于酶标仪消除、扣除“本底”， 或者，在计算阴性对照均值(NCx)、阳性对照均值(PCx)、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。 空白孔具体如何读取读数，则依照说明书操作。 如：以空气读空白(不放板架和板条)，在450nm(单波长)、或450nm和620—700mn(底物是TMB)参考波长进行读数。
2.阴性对照(品)：
(1)阴性对照(品)的概念与要求：所谓阴性对照(品)，应当是本项检测试验中采用与待捡物(样品、人的血清等)具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素(血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应)之间的差异。因此，用动物血清或其制品(如牛血清白蛋白等)代替阴性人血清作为对照品，从理论和实践上都是不可取的，弊端甚多，无须细述。 阴性对照读数，并非是“越低越好”。NCx值接近0.00X水平，这是假象!试想一下，真正采用“阴性人血清”的阴性对照品，NCx值会如此之低吗? 一个题外插曲：表明ELISA试剂内在质量的一个重要统计标志，就是要看：阴性样本的的上限不应当大于、必须小于C.O.I.=1.00;反之，阳性样本的的下限不可小于、应当大于C.O.I.=1.00! 这里如此细说NCx是因为NCx值在Cut off值计算中是相当举足轻重的。
(2)阴性对照(品)分为两类
一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平，并且是结果判断值(Cut off)计算式中决定“是”(阳性)、或“否”(阴性)的可变值。阴性对照值高，导致假阴性;反之，导致假阳性。 二是阴性对照设置，在方法学上要求加入指示性定量标准品，或者，选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照。此类Cut off 值计算时，多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。
3.阳性对照(品)：
(1)阳性对照(品)的概念与要求：同阴性对照(品)，只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。
(2)阳性对照(品)设置，也可区分为两种类型与用途：
一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入Cut off值计算、但是不可不做。 二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cut off的计算。此时的Cut off值的含义是代表该标志物在健康(正常)人群中正常值范围的上限。待检样本检测值超过该上限(Cut off)时表示有诊断意义。
阳性与阴性灰带
此处所指阳性与阴性灰带率%，既是试剂本身的质量评价指标，也是判断待检样本中是否有需要重复复检的可疑样本范围(Sample Retest Range)，及各批/次试验时可疑样本占有率。
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