北京华运安特科技有限责任公司
2011/4/21 12:04:03简易细菌测试瓶使用说明书
谢谢使用北京华运安特科技有限责任公司出品的测试瓶系列产品,请在使用前仔细阅读该使用说明手册。
一、产品品种:
大肠菌群测试瓶(FCB)
腐生菌测试瓶(TGB)
铁细菌测试瓶(FEB)
硫酸盐还原菌测试瓶(SRB)
石油烃降解菌测试瓶(HDB)
二、方法原理:
采用绝迹稀释法,即用无菌注射器将待测定的水样逐级注入到测试瓶中,进行接种稀释后,置于培养箱培养,根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数,计算出水样中细菌量总数。
三、操作步骤:
① 将同一品种测试瓶排成一组,依次编上序号(按照估计的细菌量确定测试瓶个数,建议参考数值为:X×100的细菌量用3个测试瓶、X×101的细菌量用4个测试瓶、X×102的细菌量用5个测试瓶、X×103的细菌量用6个测试瓶)。
做二个平行样重复试验时应排为二组;做三个平行样重复试验时应排为三组。
② 用无菌注射器取1ml代表性水样(采样方法依据GB/T12997-1991、GB/T12998-1991、GB/T12999-1991、GB/T14581-1993的规定进行)注入1号瓶内稀释,充分振摇,待用(平行样亦按此操作,下同);
③ 用另一支无菌注射器从1号瓶内抽取0.5 ml经充分振摇后的水样注入2号瓶内稀释,充分振摇,待用;
④ 再用一支无菌注射器从2号瓶中内抽取0.5ml经充分振摇后的水样注入3号瓶内稀释,充分振摇,待用;
⑤ 依次类推稀释直到zui后一瓶为止,待用。
⑥ 将上述所有稀释过的测试瓶放入恒温培养箱中培养,按表1进行细菌生长的鉴别。
表1 细 菌 生 长 的 鉴 别 方 法
细菌瓶品种 | 规格型号 | 培养温度 | 培养 时间 | 阳性反应特征 | |
BT | 37± | 24±2h | 瓶中液体由红变黄、或液体混浊、或液体表面出现菌膜、或液体底部出现沉淀。 | ||
大肠菌群测试瓶 | 总大肠菌群 | TCB | 37± | 24±2h | 瓶中液体由紫红变黄 |
粪大肠菌群 | TCB | 44± | |||
腐生菌测试瓶 | TGB | 现场采样温度±3℃ | 24±2h | 瓶中液体由红变黄 | |
铁细菌测试瓶 | FEB | 7d | 瓶中液体棕色褪去,生成棕色或黑色沉淀(硫化亚铁/铁单质) | ||
硫酸盐还原菌测试瓶 | SRB | 7d | 瓶中微黄色液体变黑或生成黑色沉淀(硫化亚铁) |
四、细菌量计量:
1.在一定温度下培养一定时间后,按瓶号列出稀释梯度,并根据细菌瓶阳性反应的个数,确定生长指标和级数(参见附录及示例).
2.根据生长指标查表2或表3,确定细菌量基数并乘以级数,即为细菌量总数。
细菌量总数=细菌量基数×级数
二组平行样重复试验查表2
三组平行样重复试验查表3
3、细菌量总数结果报告示例见表4
五、注意事项
1、测试瓶中若有白色沉淀为过量营养成份,属正常现象,不影响测试。
2、常温条件下,测试瓶储存有效期为一年。
3、测试瓶经稀释后,一定要用力振摇1~2分钟,以保证测试结果的准确性。
表2 二 次 重 复 细 菌 量 基 数 表
生 长 指 标 | 细菌量 基数 (个/ml) | 生 长 指 标 | 细菌量 基数 (个/ml) | 生 长 指 标 | 细菌量基数 (个/ml) | 生 长 指 标 | 细菌量 基数 (个/ml) | 生 长 指 标 | 细菌量基数 (个/ml) |
000 | 0.0 | 020 | 0.9 | 111 | 2.0 | 201 | 5.0 | 220 | 25.0 |
001 | 0.5 | 100 | 0.6 | 120 | 2.0 | 210 | 6.0 | 221 | 70.0 |
010 | 0.5 | 101 | 1.2 | 121 | 3.0 | 211 | 13.0 | 222 | 110.0 |
011 | 0.9 | 110 | 1.3 | 200 | 2.5 | 212 | 20.0 | | |
表3 三 次 重 复 细 菌 量 基 数 表
生长 指标 | 细菌量 基 数(个/ml) | 生长 指标 | 细菌量 基 数(个/ml) | 生长 指标 | 细菌量 基 数 (个/ml) | 生长 指标 | 细菌量 基数 (个/ml) | 生长 指标 | 细菌量 基数 (个/ml) |
000 | 0.0 | 110 | 0.7 | 211 | 2.0 | 300 | 2.5 | 320 | 9.5 |
001 | 0.3 | 111 | 1.1 | 212 | 3.0 | 301 | 4.0 | 321 | 15.0 |
010 | 0.3 | 120 | 1.1 | 220 | 2.0 | 302 | 6.5 | 322 | 20.0 |
011 | 0.6 | 121 | 1.5 | 221 | 3.0 | 310 | 4.5 | 323 | 30.0 |
020 | 0.6 | 130 | 1.6 | 222 | 3.5 | 311 | 7.5 | 330 | 25.0 |
100 | 0.4 | 200 | 0.9 | 223 | 4.0 | 312 | 11.5 | 331 | 45.0 |
101 | 0.7 | 201 | 1.4 | 230 | 3.0 | 313 | 16.0 | 332 | 110.0 |
102 | 1.1 | 202 | 2.0 | 231 | 3.5 | | | 333 | 140.0 |
| | 210 | 1.5 | 232 | 4.0 | | | | |
表4 细 菌 量 总 数 结 果 报 告 示 例 表
示例 | 长 菌 观 察 | 生 长 指 标 | 级数 | 细 菌 量 总数 (个/ml) | |||||
1号瓶 | 2号瓶 | 3号瓶 | 4号瓶 | 5号瓶 | … | ||||
0级 | 1级 | 2级 | 3级 | 4级 | … | ||||
1 | +- | -- | -- | -- | -- | | 100 | 100 | 0.6×100 |
2 | ++ | ++ | -- | -- | -- | … | 200 | 101 | 2.5×101 |
3 | +++ | +++ | +++ | ++- | --- | … | 320 | 102 | 9.5×102 |
4 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | … | 300 | 104 | ≥2.5×104 |
附录
一、 生长指标的确定原则.
1.全部呈阳性反应的zui后一列平行样应为生长指标的*位数.
2.同一平行样,有X个阳性反应瓶,生长指标即为X.
二、级数的确定原则
1.全部呈阳性反应的zui后一列平行样的瓶号数减去1,即为级数n,以10n表示.
2.1号瓶的2或3个平行样未全部发生阳性反应时,级数为0,即为100
① ② ③ ④ ⑤
+ - - - -
+ + - - -
+ + + - -
生长指标: 3 2 1
级 数: 100 (①-1=0)
示例2
① ② ③ ④ ⑤
+ + + - -
+ + + - -
+ + + + +
生长指标: 3 1 1
级 数: 102 (③-1=2)
示例3
① ② ③ ④ ⑤
+ + - + -
+ + + - -
生长指标: 2 1 1
级 数: 101 (②-1=1)
示例4
① ② ③ ④ ⑤
- + - - -
+ - + - -
生长指标:1 1 1
级 数: 100
细菌测试瓶测试方法及结果报告示例
例、做三个平行样重复试验,每个样稀释5个梯度:
① ② ③ ④ ⑤
①/ ②/ ③/ ④/ ⑤/
①" ②" ③" ④" ⑤"
即分别在① ①/①"号瓶中注入0.5ml水样,摇匀后取出0.5ml再分别注入② ②/②"号瓶中;摇匀后取出0.5ml再分别注入到③ ③/③"号瓶中,依次类推,直至⑤ ⑤/⑤"号瓶。
在恒温下放置一定时间后(大肠菌群37℃,24小时)观察测试瓶阳性(变色)反应个数。
例1、(打√者为阳性反应---以+表示)
①√ ② ③ ④ ⑤
①/√ ②/√ ③/√ ④/ ⑤/
①"√ ②"√ ③" ④" ⑤"
+ | - | - | - | - |
+ | + | + | - | - |
+ | + | - | - | - |
3 | 2 | 1 | | |
即
则此生长指标为321,级数为0。查三次重复计数表。321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为:15×100=15个/ml。
例2、
①√ ②√ ③√ ④ ⑤
①/√ ②/√ ③/√ ④/ ⑤/
①"√ ②"√ ③" ④"√ ⑤"
+ | + | + | - | - |
+ | + | + | - | - |
+ | + | - | + | - |
| 3 | 2 | 1 | |
则此生长指标为321,级数为1。查三次重复计数表。321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为:15×101=150个/ml。
例3、
① ②√ ③ ④ ⑤
①/√ ②/√ ③/√ ④/ ⑤/
①" ②" ③" ④" ⑤"
- | + | - | - | - |
+ | + | + | - | - |
- | - | - | - | - |
1 | 2 | 1 | | |
即
则此生长指标为121,级数<0。查三次重复计数表。121对应的细菌量为1.5个/ml。此系列报告结果为:≤1.5×100既≤1.5个/ml。
例4、 ①√ ②√ ③√ ④√ ⑤√
①/√ ②/√ ③/√ ④/√ ⑤/√ 即
①"√ ②"√ ③"√ ④" ⑤"
即
则此生长指标为312,级数为2。查三次重复计数表。312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列报告结果为:11.5×102个/ml。
例5、①√ ②√ ③√ ④√ ⑤√
①/√ ②/√ ③/√ ④/√ ⑤/√ 即
①"√ ②"√ ③"√ ④"√ ⑤"√
+ | + | + | + | + |
| |
+ | + | + | + | + |
| |
+ | + | + | + | + |
| |
| | | | 3 | 0 | 0 |
即
则此生长指标为300,级数为4。查三次重复计数表。300对应的细菌量为2.5个/ml。则此系列报告结果为≥2.5×104个/ml。
注意事项:
① 做几个平行样对应查几次重复计数表(即生化检测方法中的MPN表)。
② 计算公式为:瓶号数-1=级数n,即在结果后应 ×10n。
如 1号瓶级数为0级,即在结果后×100;
2号瓶级数为1级,即在结果后×101;
3号瓶级数为2级,即在结果后×102;
③ 全部阳性反应的zui后一列应为生长指标的第1位数。
如例1中的生长指标第1位数3对应① ①/①"号瓶
例2中的生长指标第1位数3对应② ②/②"号瓶
例4中的生长指标第1位数3对应③ ③/③"号瓶
依次类推。
④ 如果*列(① ①/①"号瓶)未全部发生阳性反应,报告结果应注明“≤”,如例3;如果至zui后一列(⑤ ⑤/⑤"号瓶)全部发生阳性反应,报告结果应注明“≥”,(如例5)。此情况下说明细菌量大,应增加测试瓶的个数,以求得较准确的结果。
⑤ 测试瓶注入水样(稀释)后应用力振摇,以保证结果的准确性;逐级稀释水样时,应更换无菌注射器,以保证结果的准确性。
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