森林脑炎（蜱传脑炎）病毒ELISA检测试剂盒
广州健仑生物科技有限公司
【咨询手机】：①③⑧0②⑤②⑤②⑦⑧ 杨永汉
【咨询企鹅】：2 0 4 2 5 5 2 6 6 2
【产品名称】：森林脑炎ELISA检测试剂盒说明书
【预期用途】
本试剂盒可用于定量检测人血清血浆和脑脊髓液中的抗脑炎病毒（TEBV）的IgG抗体，从而控制体液免疫状态和确定疫苗接种后的血清转化。鉴别明显的和潜在的脑炎病毒的感染，通常附带着抗脑炎病毒的IgM的检测。
【实验步骤】
1. 将200μL已稀释的校准品、质控品和样本加到相应的微孔中。
2. 用封板片封板，室温下（18-25℃）孵育1小时
3. 揭去封板片，弃去反应液，用稀释后的洗涤液洗板3次（250μL/孔/次），后通过拍板拍去残留的液体
4. 将200μL已稀释的酶联物加到每个孔中
5. 用封板片封板，在室温下（18-25℃）孵育1小时
6. 重复步骤3
7. 将200μL TMB底物液加到每个孔中
8. 室温(18-25℃)孵育30分钟
9. 按加TMB底物液的顺序，将50μL的终止液加到每个孔中，轻轻混匀
10. 在加入终止液后10分钟内，用酶标仪在450nm±10nm处读数。
【结果的计算】
1. 标准曲线方法
在半对数纸上（或者使用自动化仪器）以每个标准品的OD值为Y轴，相应的浓度为X轴做出标准曲线，推荐使用4参数逻辑函数（Y=d+(a-b)/(1+(x/c)b)）。
样本的浓度应当直接从标准曲线中读取，如果有稀释，则在计算中应该乘以稀释倍数，如果样本的浓度过高，则需要按照实验前设置说明稀释样本。
2. 一点标定法
（1） 样本浓度的手册检测
需要使用用校准品4、质控血清和样本各自的平均OD值。校准品4的OD必须要在的范围内（见一点标定法评估表）。每次检测都必须计算检测特殊的校正因子。校准品4的理论OD值都是按特定批次检测得出的（见一点标定法评估表）。将质控血清和样本的OD乘以校正因子：
质控血清和样本浓度可以从批次参考曲线中读出。
例子：
校准品4的理论OD值 OD=1.377
校准品4的检测OD值 OD=1.273
校正因子F F=1.082
样本的检测OD值 OD=0.937
样本的校正OD值 OD=1.014
读取浓度 0.5VIEU/mL
（2） 脑脊髓液样本浓度的计算（一点标定法软件）
打开名为“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件，将QC证书的下列指标填到Excel中：
校准品4的理论OD值
校准品4的OD范围
临界1和临界2的理论OD值
临界1 OD=灰区的低点
临界2 OD=灰区的高点
填入检测到的校准品4平均OD，将脑脊髓液样本的鉴别和OD插入到已准备好的计算单中。脑脊髓液样本的求值和OD都会自动完成。
【结果的判定】
血清/血浆
＜63VIEU/mL 阴性
63-126VIEU/mL 灰区
＞126VIEU/mL 阳性
脑脊髓液
OD＜临界1理论OD 阴性
临界1理论OD＜OD＜临界2理论OD 灰区
OD＞临界2理论OD 阳性
【结果的说明】
1. 疫苗
通过检测血清血浆中的抗TBE的IgG抗体来证明血清转化
（1） 抗TBE IgG阴性
接种疫苗后无血清转化
（2） 抗TBE IgG 灰区
可能有血清转化，建议在2~4周内再次检测
（3） 抗TBE IgG阳性
接种疫苗后有血清转化
2. 感染
（1） 抗TBE IgM和抗TBE IgG 阴性
无感染
（2） 抗TBE IgM阴性和TBE IgG 阳性
这可能是潜在的免疫或者是几周或几月之前的感染
（3） 抗TBE IgM阳性和TBE IgG阴性
可能有新近感染
（4） 抗TBE IgM和抗TBE IgG都阳性
有感染
