*0 Electro
*0 Electroporation-Competent Cell
产品规格:
| * Electroporation-Competent Cel | 50μl×5 |
| pUC19 (control vector, 10pg/μl) | 10μl |
*0 电转化感受态细胞基因型：
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK
rpsL (Strr)endA1 nupG
*0 电转化感受态简要说明：
*0 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。-CMbio-
*0 来源于 MC1061 菌株，是目前实验室常用的感受态细胞之一，基因型与 DH10B 高度类似 (DH10B 为 galE15 型，而 *0 为 galU 型)。*0 生长速度快 (比 DH5α快，但比 Mach1-T1 生长速度慢)，10 小时可见克隆。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验，具有链 霉素抗性。-CMbio-
*0 电转化感受态操作说明：
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙 醇充分挥
发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中 静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 *0 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。-CMbio-
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；-CMbio-
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 悬，DNA 浓 度不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受态。-CMbio-
3. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪 推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。-CMbio-
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 1ml 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击杯 底部数次混匀后，转移到 50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 锥形离心管等），向离心管中 补加 S.O.C. 培养基至 10 ml。 倾斜 45 度放入摇床，37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。-CMbio-
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂 板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。-CMbio
*0 电转化感受态注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。 -CMbio-
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。-CMbio-
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。-CMbio-
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。-CMbio-
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。 7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓
度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。-CMbio-
8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。-CMbio-
