HRGEC 人肾小球内皮细胞
Catalogue No.: C818
Product Format: a T25 flask
Culture Properties：贴壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item | Specifications |
a T25 flask | 2X106 |
Manual | 1 copy |
Operation steps for cell culture
- 吸走用于培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
- 吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；
（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞*漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。） - 加入6-8ml*培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；
- 将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；
传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
Cell cryopreservation
1.冻存液：92%*培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）
2.降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。
Tips：
- 细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞的死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再900-1000rpm(约150g)离心3min，用新鲜的*培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
- 细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
- 细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（不超过20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。
- 不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞*漂浮。
