填料的选择
在进行制备 HPLC 时，需要选择纯度尽可能高，并可同时得到大量化合物的色谱柱。硅胶基体填充制备 HPLC 色谱柱，广泛用于合成化学、天然物化学等领域。反相制备 HPLC 色谱柱利用不同化学键合相保持峰型，实现高纯度精制。特别是 Inertsil 系列制备 HPLC 色谱柱同时具备 HPLC 分析色谱柱的高分离性能和低吸附性。此外，在进行制备 HPLC 时，与样品负荷量的大小、较短的色谱柱清洗时间、再平衡化时间快速化、溶剂去除的速度等相关的洗脱液的选择很重要。可全面满足上述项目要求的 Inertsil ODS-3 是更适于反相 HPLC 制备的色谱柱。
填料 | 特性 |
InertSustain C18 | 耐久性*，使用强酸强碱样品及洗脱液时推荐使用。 |
Inertsil ODS-4 | 保留能力中等，理论塔板数、分离度适中。 |
Inertsil ODS-3 | 保留能力*，可获得大负荷量的色谱柱，制备的首要之选色谱柱。 |
除上述之外，也提供其他反相、正相、SEC、手性制备用色谱柱。 | |
色谱柱内径和负荷量、流量关系
制备 HPLC 色谱柱的内径从 6.0mm 到 100mm 不等，可以根据使用目的及使用装置的设定流量范围不同进行选择。填料及色谱柱长度等内径以外的条件全部相同的话，流量及样品负荷量根据色谱柱的横截面积的比例调整后，几乎可以得到相同的色谱图。以下是制备 HPLC 常用的制备柱内径及使用流量的总结，供大家参考。
内径 | 负荷量 | 使用流量标准（mL/min） *1 | 手性 | 备注 | ||
反相·正相 | SEC | HILIC | ||||
4.6mm | 1 倍 | 1 | 0.2～0.3 | 0.5 | 1 | 反相、正相、HILIC、手性的规模放大研究一般使用内径4.6mm的色谱柱。 |
7.6- 8.0mm | 2.7倍 | 2.7 | 0.5～1.0 | 1.4 | 2.7 | 可以用在普通分析装置上的半制备 HPLC 色谱柱。用 SEC 的规模放大研究一般使用内径 7.6 ～ 8.0mm的色谱柱。 |
10mm | 5倍 | 5 | 1.0～1.5 | 2.4 | 5 | |
14mm | 9倍 | 9.2 | 1.8～2.5 | 4.6 | － | |
20mm | 19倍 | 19 | 3.8～5.4 | 9.5 | 19 | 制备 HPLC 用色谱柱。由于流量范围增大，需要使用装置。而且，内径 50mm 以上的尺寸，为了使安装配管时简单化，大多采用法兰型式的色谱柱。 |
30mm | 45倍 | 45 | 9.0～14 | 21 | 45 | |
50mm | 130倍 | 130 | 26～39 | 60 | 50 *3 | |
100mm | 240倍 | 480 *2 | 48～72 *2 | 120 *2 | 200 *3 | |
*1：5μm 粒径柱的情况 *2：10μm 粒径柱的情况 *3：20μm 粒径柱的情况 | ||||||
色谱柱长度
柱长 | 特性 |
50mm 以下 | 主要作为制备柱的保护柱。 |
50～100mm | 分离没有障碍的话，可实现短时间制备。 |
100～250mm | 常用的长度。制备HPLC中，推荐使用容易取得高理论塔板数的250mm色谱柱。 |
250mm 以上 | 制备液相为了进行高流量分析，使用粒径大于10μm、压力低的填料。由于大粒径填料不易取得高理论塔板数，在制备HPLC中会使用长色谱柱弥补低理论塔板数这一缺陷。而且，尺寸排阻色谱为了达到相同目的，也会使用长柱。 |
制备HPLC 规模放大
使用制备HPLC 色谱柱研究纯化条件时，所需样品量和溶剂量多，造成成本高。所以，一般使用分析色谱柱探讨精制条件，然后规模放大到制备色谱柱。
但是，如果不使用具有与分析色谱柱同等性能的制备色谱柱，则可能会造成分离效果不佳。Inertsil 即使是大口径色谱柱，峰对称性也很好，对称因子（Asy）接近1，理论塔板数（N）在长度250mm 时维持着近20,000 段。因此，可顺利实现从内径4.6mm到50mm 的规模放大。
