猪胰岛素样生长因子-2（IGF-2）ELISA试剂盒说明书-化工仪器网-手机版

猪胰岛素样生长因子-2（IGF-2）ELISA试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：猪胰岛素样生长因子-2（IGF-2）酶联免疫诊断试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清、血浆、或其它相关组织液中胰岛素样生长因子-2（IGF-2）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中胰岛素样生长因子-2（IGF-2）水平。用纯化的猪胰岛素样生长因子-2（IGF-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子-2（IGF-2）抗原，再与HRP标记的羊抗猪抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子-2（IGF-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中胰岛素样生长因子-2（IGF-2）抗原浓度。

试剂盒组成

1	25倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	3ml×1瓶
2	酶标试剂	3ml×1瓶	8	标准品（1800ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×4条	9	标准品稀释液	1ml×1瓶
4	样品稀释液	3ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	3ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	3ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行实验。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后在*孔和第二孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1200 ng/L，600 ng/L ，300 ng/L，150 ng/L，75 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。