薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。
薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄层层析,属于固-液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01μg)的分离;另一方面若在制作薄层板时,把吸附层加厚,将样品点成一条线,则可分离多达500mg的样品。因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。此外,在进行化学反应时,常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
薄层色谱仪的主要特点
1.扫描速度快并且分辨率高:20mm/s,分辨率50μm ;(扫一块200X 100 mm 的点有20个点的薄层板,约需时3 分钟 , 扫描完毕立刻得到计算结果。)可以检测厚达4mm 的薄层板。
2.扫描方式全:线性扫描, 线性—飞点扫描,雀斑轨迹优化。
3.多用性:可广泛用于凝胶电泳和等电聚焦等蛋白质、核酸研究等生化分析。
4.薄层色谱仪操纵简便,结果重现性好。
5.软件全自动控制和数据处理。
6.薄层色谱仪扫描速度快。
7.检测光谱范围宽。