力康生物-力新仪器(上海)有限公
2020/7/13 14:52:121、高温变性:模板DNA经加热至95℃左右一定时间后,使模板DNA双链解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
2、低温退火:模板DNA与引物的复性,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
3、适温延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以核苷酸为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
影响扩增的因素:
1、由于各种原因,造成的PCR扩增体系中出现了非目的检测样本本身的模板,使得PCR结果出现假阳性
2、操作错误或者误差造成的模板间交叉污染
3、PCR试剂的污染
4、PCR实验器材的污染
5、PCR扩增产物的气溶胶污染