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2020/9/9 9:54:58样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌大鼠ELISA试剂盒管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入大鼠ELISA试剂盒一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上大鼠ELISA试剂盒待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔大鼠ELISA试剂盒先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
38002-18-5 炔雌醇相关物质A标准品 20mg
536-33-4 乙硫异烟胺标准品 Ethionamide 200mg
1959/6/3 乙氧酰胺苯甲酯标准品 Ethopabate 125mg
4093-28-1 乙氧酰胺苯甲酯相关物质A标准品 Ethopabate Related Compound A 25mg
77-67-8 乙琥胺标准品 Ethosuximide 500mg
86-35-1 乙苯妥英标准品 Ethotoin 200mg
452-35-7 乙氧苯噻唑胺标准品 Ethoxzolamide 200mg
141-78-6 乙酸乙酯标准品 Ethyl Acetate 1.2ml×3ampules"
丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物水分散体标准品 " 1.5g
100-41-4 乙基苯标准品 Ethylbenzene 0.5ml×3ampules
基本原理:
1、抗原或抗体能吸附到固相载体表面,并保持其免疫学活性;
2、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,仍保持其免疫学和酶学活性;
3、 酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定大鼠ELISA试剂盒是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。