样本的制备是IHC实验成功的前提条件。样本完成石蜡包埋后,需要成约3-4um的薄片。本文主要介绍了切片小技巧及过程中容易出现的16种问题
切片小技巧
②切片厚度3-4μm(淋巴结、扁桃体、鼻咽、扁桃体2-3μm;脂肪5-6μm)
④切片动作轻,用力均匀。
⑥刀片锋利,切片角度5°,切片平整无褶皱和收缩。
⑧蜡块表面有钙点,应20%HCL表面泡1-2h,水洗后切。
切片光面朝下展片、捞片。
☞摊片水温利于展平又不熔化,必要时用20%酒精摊片。
☞细小组织(穿刺、内镜小标本)可以多贴几个。
☞在烘烤切片前应做好排水,烤片温度高于石蜡熔点5-10℃。
问题1 细胞皱缩和收缩;核“起泡”变大损伤;胶原染色嗜碱性
原因:石蜡温度过高。
解决方法:烤箱温度高于石蜡熔点5-10℃为佳。
问题2 切片卷成致密团
原因:①刀钝;②倾斜角太小;③切片太厚。
解决方法:①换新刀片;②如果间隙角充分,降低倾刀的斜度。
①组织固定、脱水、透明不*,浸蜡不透;浸蜡包埋温度过高或时间过久。
解决方法:问题4过分的压缩
原因:刀片钝;组织或石蜡过软;用力太猛,速度太快。
解决方法:②③
原因:刀刃不锋利,刀间隙角度大;蜡块内组织上下端留蜡边太少或不整齐,刀边碎片;室温过低或石蜡过硬。
移动刀口或更换刀片,检查刀的角度,清洁刀片和刀架背面;在低熔点的石蜡中重新包埋;提高室内温度或温暖蜡块表面(哈气等);切片厚度适宜(根据组织类型)。
①②③④①②③④水,开启加湿器;问题7 切片条带弯曲不直
原因:②蜡块下边与刀口不平行;④组织本身硬度不一致。
③移动刀片或更换刀片;问题8 蜡块组织脱落
原因:②蜡块冻时间过长,切片时易出现蜡块脱落现象。
②切片动作小、匀速。
①取材时未取中病灶,组织块太大,太厚;③组织块内组织不平坦;⑤切片时粗修过多(切削过深)或过少(没切到足够的深度)。
解决方法:②组织在包埋模中均匀铺平;④切片方向:软到硬,易到难,主到次。
①切片机维护不当,切片厚度设置错误;③石蜡过热;解决方法:①降低切片厚度设置;③使用适合组织类型和密度熔点的石蜡;问题11 切片纵裂,损伤,刀痕
原因:②刀片缺口;④石蜡中有杂质。
①更换刀片或移动刀口;③仔细清洁刀刃以除去多余的石蜡堆积;问题12 切片厚薄不均匀/刀/百叶窗/搓衣板
原因:②切片刀不锋利,刀间隙角(或倾斜度)太大;④切片机部件松动或磨损;⑤组织致密或坚实;⑥主轴伸出太长。解决方法:②更换刀片,减少倾斜度;④均速慢切;⑥主轴摇回复原。
①摊片温度不合适,组织未充分伸展;③石蜡熔点低,过软或室温较高;④组织缺乏一致性。
①调小刀角度,边切边向蜡块吹气用10-20%酒精摊片,利用浓度差,水的张力来展片;③更换刀片或移动刀口;问题14 切片裂缝/碎裂
原因:②摊片水温过高,摊片时间长导致过度延伸;④烤片前切片排水不净。
解决方法:②在摊片时轻轻延伸蜡带,去除褶皱和折叠;④在切片和漂片过程中,小心操作蜡带;问题15 栅状裂和龟裂
原因:②摊片水温过高;④切片过程中过度冷冻。
解决方法:②降低摊片水温;④匀速慢切,边切边对蜡块吹气。
捞片时切片下面有气泡。
解决方法:②切片要干净无污染;<span font-size:14px;"="" style="margin: 0px; padding: 0px;">③捞片前将组织下的气泡赶走