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EDTA操作说明书

上海哈灵生物试剂检测中心

2020/11/20 14:20:07

产品简介: EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂,对组织结构影响小,可以较好的保存组织的某 些酶类,经 EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢, 一般脱需要数周至数月

保存条件: 2~8°C 保存。 
操作流程: 1、骨组织脱钙时,取材不易过厚,一般大约 5mm;
2、组织固定后,用 PBS 清洗 3 次,每次 20min;
3、组织用蒸馏水洗清洗 3 次,每次 20min; 
4、组织转移至 20~30 倍体积的 EDTA 脱钙液中,脱钙 10~30 天或更长时间。如果想加快 脱钙速度,可以置于 37°C 进行脱钙。如果必要,更换新的 EDTA 脱钙液继续脱钙,多数组 织脱钙 2 周~3 个月即可,每周更换一次,直至终点; 
5、用蒸馏水冲洗数次; 
6、常规脱水、包埋。

注意事项: 1、 厚度 5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙 10~30 天即可。
 2、 适当加温能加快脱钙的速度,一般不应超过 37~40°C,温度过高容易使骨组织造成松 散解体,尤其不可大于 60°C。
 3、脱钙应*,防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短 脱钙时间,以免脱钙过长引起组织损害。 
4、 脱钙用具避免使用金属容器,尽量使用玻璃容器。
5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行,不应先脱钙后固定,以便减少组织的 损伤程度。
 6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度,避免脱钙过度,脱钙过度会增加组织的损伤程度,影 响染色结果。

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