AlphaLISA表观遗传学试剂是由Alpha技术所延伸出来的便利产品,可适用于侦测Peptide或Full-length型式的Histone蛋白。具有高度专一性,可藉由侦测各种后转译修饰类型的Histone蛋白,定量组蛋白密码(histone code)调控者(例如Acetyltransferase, Methyltransferase, Deacetylase, Demethylase)的酵素活性。与ELISA产品相比,AlphaLISA侦测试剂具有更加宽广的侦测区间,可减少样品稀释比例的测试步骤;并且具有更精简快速的实验流程,让研究者能够更快取得定量结果。
AlphaLISA表观遗传学试剂作用原理:
AlphaLISA 侦测技术是由两种核心物质所组成,一为Donor bead,另一为Acceptor bead。Donor bead 本身身带有光敏感物质"Phthalocyanine",因此当以680 nm 雷射光激发Donor bead 时,此光敏感物质可催化周遭的氧分子形成活化态,并于作用范围内激发邻近的Acceptor bead 产生化学冷光反应,此冷光能量会进一步转移至Acceptor bead 本身所带有的萤光物质,使其终产生615 nm 萤光讯号。与其他侦测平台相比(例如FRET、TR-FRET),AlphaLISA 技术的能量转移有效距离长达200 nm,因此不论是胜肽、重组蛋白、或是细胞内原始含有的蛋白质,皆可作为实验侦测对象。具有专一性佳、灵敏度高、侦测区间广泛以及流程简单等多项优质特点。
在进行实验时,研究者仅需自行准备(1). 待测酵素与辅因子(cofactor)、(2). 键结有Biotin 的Histone peptide substrate (或Histone 全长蛋白),即可开始进行实验。此两项所需试剂在产品应用文件中皆有详尽的建议资讯,因此研究者可安心参照选购。
AlphaLISA anti-histone H3 K9me2 antibody Acceptor beads的专一性测试结果证实此试剂的确能够专一性地辨识侦测H3K9me2 biotinylated peptide,并且无论是H3K9me1 peptides、H3K9me3 peptides、methylated H3K4 peptides、unmodified H3 peptides,皆无法干扰反应产生伪阳性结果。
所有Alpha系列的Histone modification侦测试剂,皆实际使用特定酵素进行完整测试,具有详尽的测试条件与实验流程可供参照。使用G9a Histone H3-Lysine N-methyltransferase所进行的酵素用量和时间反应测试结果,受测产品为Anti-methyl-Histone H3 Lysine 9 (H3K9me2) AlphaLISA® Acceptor Beads (需同时搭配Alpha Streptavidin Donor beads等产品使用)。其他测试项目包含:Cofactor titration (ex, SAM)、Enzyme inhibition、Z'-factor determination.
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