正确及时的冲洗色谱柱？
开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。异丙醇是能与各种溶剂混溶的试剂,可作为中介流动相使用。反相键合硅胶柱适宜的保存环境是纯甲醇,如分析用流动相为缓冲液2有机溶剂,可先用较低甲醇含量(<20%)的甲醇2水置换掉原来的纯甲醇,再进分析用流动相，以防止在柱内发生盐的沉淀；试验结束后,要及时用适当的溶剂冲洗系统并终过渡到纯甲醇冲洗,对于含有缓冲盐的流动相，办法是先用与分析用流动相组成*相同但不含缓冲盐的溶液进行冲洗，再逐步过渡到纯甲醇冲洗。多数报道冲洗液体积大约为柱容积的15～20倍,但终要以基线是否平直、压力是否稳定决定。有些厂家的色谱柱标明了流动相中有机相的较低使用浓度为≥5%,使用时应给予注意。
注意温度和酸碱度
一般以硅胶为基质的色谱柱使用温度不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解，从而，使填料性质改变，柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10,但在实际使用时应避免pH条件,特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用,如必须要在不正常的pH条件下使用时,可通过以下方法避免柱损害：
(1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相；
(2)降低使用温度；
(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”*清洗；
