大鼠血浆的操作规程究竟是怎样的？
1、大鼠取全血3.5或4.5ml,放置40min左右,4000r/10min离心。
2、向1.5mlEP管中依次加入20u1内标液、A中血浆100或150ul,涡旋30s,置-20℃冻存至样品处理。
3、取大鼠血浆体积100或150u1(先放置4℃融化再拿至室温),涡旋30秒,加入沉淀(甲醇:乙腈=1:3)400或600u1或萃取剂(乙酸乙酯)800或1200u1,涡旋1.5min14000r/10min离心。
4、取上清液加入1.5mlEP管:沉淀剂时为450或ul;萃取剂时为或ul。
5、氮气吹干30-45℃(吹干时间沉淀剂为45min左右,萃取剂为30min左右)。
6、用100u1甲醇复溶,涡旋2min,1400r/10min离心。
7、进样瓶处理:先加入100u1甲醇,放入内插管。
8、取上层液体90ul加入进样瓶内插管中,将瓶盖用保鲜膜包裹后盖上放入4℃至进样。
9、用液相进样时体积为10或20u。
大鼠血浆的操作注意事项？
1、实验过程中所使用的耗材都为进口级(EP管,枪头等),除取全血时EP管使用国产。
2、需要血浆量根据实验结果制定选择100或150u1。
3、加入血浆及20u1内标液时一定要认真,细心,加药过程严格按照移液枪操作规程,保证结果的准确度、精密度。
4、实验过程样品处理时EP管标号一定要清楚、仔细,操作过程做好有一个人在旁边检査或处理完一个换一个位置。
5、实验样品处理一定要一套一套处理(一只鼠的样品一次处理完毕),以减小结果误差同时样品不容易混淆、出错。
