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2021/3/12 17:48:56complementtech R137说明书
名称:因子H蛋白(大鼠)
目录号:R137
可用规格:100µg/瓶
浓度:1.0 mg/mL(准确浓度见检验报告)
形态:液体
纯度:> 90%(SDS-PAGE法)
缓冲液:10 mM磷酸钠,145 mM NaCl,pH 7.3
消光系数A280 nm = 1.682(1.0 mg/mL)
分子量:155000 Da(单链)
豁免前:无,0.22µm过滤
储存:-70 ℃
C或以下。避免冻融。
来源:来自健康动物的正常大鼠血清
预防措施:使用常规预防措施处理动物血液制品。
来源:美国生产。
从正常大鼠血清中纯化大鼠(Rattus Norvegicus)补体因子H(fH)。H因子是补体替代途径的重要调控成分。这对于防止宿主细胞和组织(尤其是肾脏)的补体激活至关重要。它具有两个功能活性:1)控制替代途径C3 / C5转化酶的形成和衰减(衰减加速活性); 2)作为I因子的辅因子,当C3b与H因子结合时,它通过蛋白水解作用使C3b失活(辅助因子活性)。据报道,C3b结合蛋白类似于从大鼠血浆中分离出的H因子,它是由大鼠血小板产生的,并起着免疫粘附受体的作用,可清除啮齿动物中的免疫复合物(Alexander JJ等人(2001年))。
一般描述
大鼠(褐家鼠)补体因子H(fH)从正常大鼠血清中纯化而来。因子H是补体替代途径的重要调节成分。它对于预防宿主细胞和组织(尤其是肾脏)上的补体激活至关重要。它具有两种功能活性:1)控制旁路途径C3/C5转化酶的形成和衰变(衰变加速活性),和2)作为因子I的辅因子,当C3b与因子H结合时,其蛋白水解使C3b失活(辅因子活性)。据报道,C3b结合蛋白与从大鼠血浆中分离的因子H相似,由大鼠血小板产生,并作为免疫粘附受体在啮齿类动物中清除免疫复合物(Alexander J.J. et al.(2001))..(2001)).
因子H是由20个同源结构域组成的155000 Da蛋白,在半柔性串上像微珠一样排列。N端5个结构域与C3b结合并抑制因子b的结合,从而减少C3/C5转化酶的形成。因子H还与预形成的C3/C5转化酶(C3b、Bb和C3b、Bb、C3b)结合,并引起催化亚基Bb的快速释放(衰变加速)。这些活性对于控制血浆中替代途径扩增过程的自发激活至关重要。此外,当C3b附着在颗粒表面时,因子H控制这些酶的形成和衰变。对宿主细胞有效,对外来颗粒效果较差,原因如下。补体的替代途径是通过产生液相C3b样C3(H2O)和C3b的“蜱”不断激活。因子H可与这些蛋白结合并作为辅因子,使因子I(一种以活性形式循环的丝氨酸蛋白酶)可裂解其产生无活性蛋白(iC3b或iC3(H2O))的α链。如果C3b不以这种方式失活,它继续形成C3转化酶,消耗因子b和C3。如果C3b附着在表面,则通过因子H和i以相似的方式转化为iC3b。当C3b驻留在宿主细胞上时,由于因子H识别的宿主标记物的存在,因子H更有效。由于因子H识别的宿主特异性识别,补体介导的宿主损伤小化。
因子H似乎通过识别宿主标志物来调节潜在病原体与宿主细胞和组织之间的区分。连接到表面的C3b可以启动替代途径的扩增级联。因子H在宿主细胞上阻止了这一点,并使其发生在不带有宿主样标记的表面。这些宿主特异性结构被认为是聚阴离子簇,如唾液酸和硫酸化糖胺聚糖。通过位于因子H结构域6-20的多个多阴离子结合位点识别宿主标志物。一个位点位于结构域7,该结构域的突变(Y402H)与年龄相关性黄斑变性中的补体激活和组织破坏密切相关(Zipfel,P.F. et al.(2006)).一个暂定位点位于结构域12-14区域,一个非常重要的位点位于结构域19-20的C-末端。该C-末端位点似乎是帮助结合宿主表面的主要位点。在遗传性溶血性尿毒症综合征中,影响或位于这些结构域的突变导致补体替代途径的激活(Zipfel,P.F. et al.(2006)).该位点似乎是参与聚阴离子依赖性二聚体和因子H四聚体形成的位点(Pangburn,M.K. et al.
(2009)).
物理特性和结构据报道,大鼠因子H的分子量约为150,000至155,000道尔顿(Daha MR et al.(1982);Demberg Tet al.(2002);Alexander JJ et al.,2001)。大鼠因子H的糖基化水平为9.5%(Demberg Tet al.,(2002)。在非还原和还原条件下通过SDS/聚丙烯酰胺凝胶电泳(Invitrogen)对纯化的大鼠因子H(目录号R137)进行分析,结果显示有一条条带略微早于人因子H(155,000道尔顿)迁移。使用ProtParam,根据其氨基酸序列计算大鼠因子H的消光系数(E1%/280 nm = 16.82),并假设所有Cys残基对均形成胱氨酸(即一对半胱氨酸分子通过二硫键连接)。根据其氨基酸序列计算的pI为6.29。Demberg Tet al.(2002)报告因子H大鼠血清的正常血浆浓度为238 + 21 μg/mL,而Daha MR et al(1982)报告为244 + 21 μg/mL。
功能参见上述一般描述。
分析H因子的功能试验测量其衰变加速活性或I因子辅因子活性(Morgan,B.P.(2000))。已报告了连续监测的荧光测定法(Pangburn,M.K. et al.(1983)),该方法利用存在C3b时ANS(8-苯胺基-1-萘磺酸)的荧光下降约8倍(当C3b转化为iC3b时)。因子H的其他功能试验见人因子H的含量测定章节(目录号A137)。
使用方便的辅因子测定法(通过SDS凝胶测定纯化C3b的裂解)测定纯化大鼠因子H(目录号R137)的辅因子活性。
在存在1µg人因子I(目录号A138)的情况下,将4 μg(4 μg)大鼠C3b(目录号R114)与不同量的大鼠因子H(目录号R137,范围为0.1至1µg,总体积为12µL)共同孵育。将试验置于湿冰上,然后在37 ℃下孵育15 min,此时向试管中加入含还原剂的SDS样品缓冲液,并将样品加热5 min。SDS凝胶分析显示,在 > 0.02 μg大鼠因子H和1 μg人因子I存在的情况下,大鼠C3b的α链裂解 > 90%。
功能在上述一般描述章节中描述了因子H的生物学功能。
遗传学大鼠因子H染色体位置13。大鼠因子H的NCBI基因ID编号为155012,UniProt登录号为Q91YB6。
预防措施/毒性/危害:该蛋白从动物血浆/血清中提纯,因此必须采用适用于处理任何动物血源性产品的预防措施。
危害代码:B WGK Germany 3MSDS可根据要求提供。
CAS登记号:80295-65-4