Q1：HPLC 方法开发中首要的挑战是什么？
A1：首要的挑战有两个。首先是化合物之间的分离度 问题，色谱分析的前提是分离，只有充分分离才能准 确地定量（使用 MS 作为检测器时对于非同分异构体 等情况例外）；其次是分析物色谱峰的峰形，当峰形 不佳的时候（可以用拖尾因子、柱效等来衡量），也 会影响分析物的定量和分离。
Q2：有哪些方法可以解决分离度的问题？
A2：1990 年研究人员对这个问题进行了系统的研究， 认为分离度 Rs 主要由三个因素决定，也就是柱效 N， 选择性 α 和保留因子 k（如下图）。这些年来的很多 技术革新都是通过提高 N 来提高分离度，比如设计了 核壳硅胶作为色谱柱填料基质或者用 UPLC 仪器搭配 小粒径（亚 2 μ）颗粒填料。但更根本和有效的途径是 通过改变选择性来实现分离，也就是改变难分离的化 合物与固定相和流动相之间的作用力，从下图中也可 以看到，通过改变选择性可以有效改善分离度。
Q3：有哪些方法可以改变选择性？
A3：改变选择性的方法有很多。最重要的就是从三个 角度出发：分析物本身、流动相以及固定相。对于可 离子化的分析物，根据化合物的 pKa 针对性地改变流 动相 pH 可以有效改变选择性；另外，由于常用的溶剂 （正相中的乙醇、异丙醇，反相中的甲醇、乙腈）在 氢键、极性作用等的差异比较大，因此改变流动相时 常常也会有效改善选择性；还有非常重要的是可以根 据难分离的化合物之间的差异，针对性地选择可以识 别这些差异的色谱柱，比如 π-π 作用、氢键作用、偶极 - 偶极作用、疏水作用、离子交换作用、形状选择性等， 通过选择合适的色谱柱往往也能达到出奇制胜的效果。
Q4：峰形问题有哪些原因和解决办法？
A4：解决峰形问题最关键的是找对原因。造成峰形问 题的原因有很多，但是大部分是化合物本身的原因， 比如含有与固定相产生强作用的基团（如含 N 的碱性 基团、螯合基团等），或者含有在某些流动相条件下 会互变的基团等。至于解决办法，就需要对症下药， 比如对于前者就需要在流动相中加入添加剂或者选择 更“惰性”的柱子，对于后者就需要选择更合适的流 动相条件或者改变分离模式。
Q5：星谱科技提供的色谱柱有哪些优势？
A5：星谱科技目前主要提供英国 Horizon 色谱公司的 色谱柱，这些色谱柱的主要优势有三个：首先，它的 多款色谱柱具有*的选择性，在解决分离度问题方 面很有优势，比如 C18/AR、C18/PFP 和 amide 18 等 复合型固定相设计，可以在保留 C18 疏水性的基础上 引入比如 π-π 作用、氢键作用、偶极 - 偶极作用等； 其次，几乎所有的这些键合固定相都有核壳硅胶基质 类型填料可供选择，保证在好的选择性的同时具有高 柱效，从而获得更好的分离度；最后，Horizon 色谱 柱选择的硅胶都是超纯、超惰性的硅胶，可以尽量降 低因分析物和硅胶表面的作用而造成的峰形问题。总 结来说，Horizon 色谱柱是解决色谱分析中分离度和 峰形问题的利器。同时，星谱科技的技术人员对色谱柱也有深刻的理解，因此可以根据用户的具体项目需 要更精准地选择色谱柱，节约方法开发的时间。
