Collagen I detection system kit (Rabbit)

产品货号：IHC0578

产品规格：50-100T

产品描述：我公司免疫组化（IHC）试剂盒套装为免疫组化检测提供一站式解决方案，方便快捷。可用于检测以兔单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验。抗原与一抗形成抗原抗体复合物，生物素化二抗特异性结合上述复合物，经辣根酶标记的链酶卵白素特异性识别生物素，最后经辣根酶底物显色即可检测相应抗原。

保存条件及有效期：一抗体-20℃保存，避免反复冻融，一年有效；其他试剂2-8℃避光封闭保存一个月。

本试剂盒适用于人、大、小鼠等组织，产品规格及组成：

样本要求：新鲜活检样本组织，中性福尔马林或多聚甲醛，固定时间 12-48h，参照病理技术规范要求取材、脱水、石蜡包埋并制成蜡块，蜡块在常温条件下保存有效期有 5 年。组织切片厚度为 3-5μm 并黏

附在防脱玻片上，轻拍切片架并用吸水纸吸干组织切片中的水滴，再放入 56-60℃恒温箱中烘烤 2h 后，从恒温箱中移出玻片放在温室下冷却。如果切片在室温下（15-28℃）保存，为了良好的重现组织中的抗原分

布情况，请于切片制作后 7 天内完成检测。

实验操作步骤（以石蜡切片为例）

仪器、设备：

移液枪、免疫组化笔、水浴锅、计时器、孵育湿盒、切片架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶等。

操作步骤

• 脱蜡水化。将石蜡切片置于新鲜二甲苯脱中浸泡 15 分钟，重复三次。去除多余的液体后，依次置于无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，各浸泡 5 分钟，蒸馏水（或自来水）冲洗 5 分钟。用 PBS 缓冲液（试剂 1，将干粉溶解于 1L 去离子水中）冲洗切片 5 分钟，重复三次。

2. 抗原修复。将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯（或修复盒）中的耐高温塑料切片架上，加适量修复液 1× 柠檬酸钠抗原修复液（试剂 2，将 100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成 1×柠檬酸钠抗原修复液），液面要浸过切片组织一定高度，将修复盒置于沸水中煮沸修复 15 分钟后取出玻片，自然凉至室温。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。

注意：抗原修复时，修复液务必保证切片始终浸泡在液体内，一般情况：修复液的量约为 800mL/1 架。3.阻断内源性过氧化物酶。用吸水纸擦干玻片，免疫组化笔在组织周围画圈，滴加 50μL 内源性过氧化物酶阻断剂（试剂 3）到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育 30 分钟，用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。

• 血清封闭。用吸水纸擦干玻片，滴加 50μL 正常山羊血清工作液（试剂 5），37℃封闭 20 分钟，以减少非

特异性染色。

5. 一抗孵育。用抗体稀释液（试剂 4）将一抗原液稀释成工作液，用吸水纸擦干玻片组织周围的液体，滴加适量抗体工作液，置于湿盒 4℃孵育过夜或 37℃孵育 1h-2h。

6. 复温。4℃过夜后从冰箱拿出样本，在室温下孵育 15min 复温（抗体孵育为 4℃过夜选用此步骤，如室温孵育直接进入下一步清洗）。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。

7. 二抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 生物素标记的羊抗兔 IgG（试剂 6），37℃孵育 20  分钟，用 PBS

缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。

• 三抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 辣根酶标记的链酶卵白素孵育（试剂 7），37℃孵育 20  分钟，用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟，重复三次。
• 显色。甩去 PBS 缓冲液，吸水纸擦干切片； 每张切片滴加新鲜配制的 DAB 工作液 50μL（试剂 8：试剂 9：试剂 1=1:1:18  比例配置），孵育 3-5min，光学显微镜下观察染色结果，切勿显色过深；显色后用自来水冲洗切片终止显色。

10. 复染。滴加适量苏木素染液（试剂 10）复染，孵育 1-5 分钟，自来水冲洗 5 分钟，滴加盐酸酒精分化