核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物，主要参与构成核酸，许多单核苷酸也具有多种重要的生物学功能，如与能量代谢有关的三磷酸腺苷（ATP）、脱氢辅酶等。核苷类药物，包括其衍生物是一类重要的抗癌药物，也可作为抗病毒药物来抑制病毒在人体内的生长繁殖。这些化合物属于大极性化合物，常规的反相色谱柱通常难以保留。而使用HILIC色谱柱会遇到同分异构体的挑战从而无法分离。
赛默飞黑科技
——Hypercarb 色谱柱
赛默飞黑科技——Hypercarb 色谱柱，填料为100%的多孔石墨化碳（PGC），球形全多孔颗粒。碳原子排列成六边形为骨架的多片层结构，没有任何其它的亚孔或键合相。基于这一特点，Hypercarb色谱柱具有不同于硅胶基质固定相的*性质。Hypercarb的表面具有空间选择性，可以分离几何异构体及其它结构相近的化合物。Hypercarb对各种流动相溶剂都表现出较好的稳定性，pH在1-14之间的流动相皆可用于分离，这使其可在一次运行中对各种极性的化合物进行分析。基于Hypercarb*的疏水和电子云保留机理，它非常适合解决HPLC及LC/MS反相和HILIC应用中的“问题”分离，能够以超凡能力保留强极性化合物并分离结构性质接近的化合物。
小编通过两个案例分享，采用Hypercarb色谱柱，挑战极性化合物保留分离，如同带上开挂神器，在碱性流动相条件下，充分保留和分离核苷酸、阿糖胞苷及其含有同分异构体的磷酸化衍生物，对于其他类似结构的极性化合物分离具有极大的参考意义。
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01
Hypercarb用于5种核苷酸保留分离
仪器：Vanquish Duo UHPLC
色谱柱：Hypercarb，100x3mm，3um（P/N 35003-103030）
流动相：A：0.3%甲酸水，用氨水调pH=9；B: 乙腈
流 速：0.8 mL/min
进样量：5 μL
检测波长：UV 254 nm
图1 5种核苷酸分离效果
图2 婴幼儿配方全脂羊乳粉中核苷酸分离效果
图3 5种核苷酸重复性谱图（n=3）
使用Hypercarb色谱柱能有效分离全脂羊乳粉中5种核苷酸与其他杂质，结果可靠，可满足实验室检测需求。图3为5种核苷酸的重复性谱图，可以看到重复性良好，保留时间和峰面积RSD均＜1%。
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02
Hypercarb用于阿糖胞苷及其磷酸化衍生物保留分离
仪器：Vanquish Duo UHPLC
色谱柱：Hypercarb，100x3mm，3um（P/N 35003-103030）
流动相：A：己胺 (5mM) ，加入DEA (0.4%, v/v), 用冰醋酸调pH=10；B: 乙腈/水 (1/1, v/v)
流 速：1 mL/min
进样量：20 μL
检测波长：UV 272 nm
图4 7种阿糖胞苷类化合物分离
图5 7种阿糖胞苷类化合物重复性谱图（n=6）
使用Hypercarb色谱柱保留和分离阿糖胞苷及其磷酸化衍生物，所有化合物均能基线分离，5号峰CTP与7号峰Ara-CTP这两种非对映异构体分离。7种阿糖胞苷类化合物在Hypercarb色谱柱上连续6针进样，重复性表现优异，保留时间和峰面积RSD＜2%。
本方案开发基于LC-UV，能够分离颇具挑战的非对应异构体CTP与Ara-CTP，对于有低浓度分析要求的实验室，该方案可根据实际需求应用于LCMSMS。
今天的分享就到这里啦，大家是不是对Hypercarb保留分离极性化合物更有信心呢？想要获取更多信息，欢迎扫描下方二维码获取应用报告“Hypercarb色谱柱用于核苷酸类及其磷酸化衍生物的分析”，下期再会！
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