BOD5测定原理
稀释与接种法是生化需氧量标准方法，又称为五天培养法，即取一定量原水样或稀释水样，使其*充满密闭培养容器，(也就是溶解氧瓶) ，在20℃±1℃暗处恒温连续培养五昼夜(5d±4h) ，分别测定培养前后水样溶解氧浓度，二者之差称为五日生化需氧量，单位以氧的毫克/升。
水中可被微生物降解有机物浓度越高，水中溶解氧消耗量越多，BOD,值也愈高,水质愈差。因此，BOD5是间接表示水体受有机物污染程度及衡量废水生化处理过程中净化效率的一个综合性水质指标，它反映的可生化降解性是其他参数无法替代的。
但是，污( 废) 水中各类可生化降解有机物要被微生物*氧化分解所需时间很长，如在20℃培养条件下，完成此过程约需100天，为缩短检测时间，目前国内外普遍应用 BOD5 来近似表征水和废水中有机物被微生物*氧化分解所消耗溶解氧量，BOD5 测定值约相当于最终生化需氧量的70%。
对于溶解氧浓度较高、有机物含量较少地表水，可直接取样培养测定；
对于受污染地表水及大多数工业废水，因含较多有机物，需要稀释后再培养测定，以降低有机物浓度和保证充足溶解氧；
对于某些不含或少含微生物工业废水，包括酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存废水和经氯化杀菌处理废水等，测定前应在水样中引入可分解水中有机物微生物，这种方法就是接种；
对于一些废水中存在难于被一般生活污水中微生物以正常速度降解有机物或含物质时，可在水样中接种经驯化后适应性微生物。
Bod5分析前准备工作
(1) 分析前4 h启动恒温生化培养箱，设定箱内温度20℃，并使正常运行(必要时，可使用水银温度计检测培养箱内温度，严格控制在20 ± 1℃ ) 。
(2) 分析前检查 BOD5 恒温测定室室内温度及空调运行情况，保持室内温度在 20℃，确保空调稳定正常运行( 必要时，可使用水银温度计检测恒温测定室内温度，严格控制在20℃±1℃) 。
(3) 将分析用稀释水、接种液和接种稀释水敞口放入到恒温生化培养箱内恒温并在 24 h内使用。
干扰物质的去除
(1) 若水样中含有较多活性或惰性大颗粒悬浮物，将干扰 BOD5 测定，需使用超声波清洗器对水样进行均质化预处理，具体做法如下：
量取适量水样，全部转入500 mL烧杯中，将烧杯放入超声波清洗器浴槽内，开启超声器，作用时间设为5min，利用超声波对液体空化作用，样品中可见的团块状或大颗粒状悬浮物逐渐破碎并*溶解，表明已达到充分混合、均化程度，可量取水样进行测定。
(2) 若水样中含有藻类，BOD5 测定结果将偏高，测定前应将水样*通过孔径1.6μm滤膜过滤器，过滤去除藻类物质。
(3) 若水样中含有少量游离氯(使用淀粉－碘化钾试纸检测)，一般放置1 h～2 h即可消除干扰。对于游离氯含量高短时间内不能消散水样，可加入亚硫酸钠溶液，将水样中游离氯还原去除。
(4)若水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质，将干扰BOD5 测定，可使用含有经驯化微生物接种稀释水进行接种稀释，或提高稀释倍数以降低毒物浓度。
